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公开(公告)号：CN112342234A
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN202011165109.2
申请日：2020-10-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种调控N‑乙酰神经氨酸产量提高的重组枯草芽孢杆菌，属于枯草芽孢杆菌代谢工程和基因工程技术领域。本发明所述重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是以低产N‑乙酰神经氨酸的重组枯草芽孢杆菌菌株作为出发菌株，通过正向响应N‑乙酰神经氨酸的生物传感器调控必需基因表达来偶联生长与合成，构建了一种细胞亚群调控回路，从而赋予高产细胞亚群生长优势，提高其在发酵过程中所占的比例，从而得到的一株高产N‑乙酰神经氨酸的重组菌株，其产量达到2.97g/l，是不进行细胞亚群调控的对照菌株的1.55倍。这为枯草芽孢杆菌代谢工程高效生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112342234B
公开(公告)日：2023-02-21
申请号：CN202011165109.2
申请日：2020-10-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种调控N‑乙酰神经氨酸产量提高的重组枯草芽孢杆菌，属于枯草芽孢杆菌代谢工程和基因工程技术领域。本发明所述重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是以低产N‑乙酰神经氨酸的重组枯草芽孢杆菌菌株作为出发菌株，通过正向响应N‑乙酰神经氨酸的生物传感器调控必需基因表达来偶联生长与合成，构建了一种细胞亚群调控回路，从而赋予高产细胞亚群生长优势，提高其在发酵过程中所占的比例，从而得到的一株高产N‑乙酰神经氨酸的重组菌株，其产量达到2.97g/l，是不进行细胞亚群调控的对照菌株的1.55倍。这为枯草芽孢杆菌代谢工程高效生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112961879A
公开(公告)日：2021-06-15
申请号：CN202110219450.X
申请日：2021-02-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种N‑乙酰神经氨酸生产稳定性提高的重组枯草芽孢杆菌，属于枯草芽孢杆菌代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过将两个单输出细胞亚群调控回路组合，构建了一种可以提高亚群调控回路稳定性的的双输出亚群调控回路。在双输出亚群调控回路中，存在两个传感器启动子Pveg105作为输出启动子，只有当两个Pveg105同时发生遗传突变，细胞亚群调控回路才会失效，这增加了亚群调控回路的稳定性。所得到的重组枯草芽孢杆菌可以在96h的连续传代发酵培养过程中一直维持NeuAc生产，且产量稳定在0.65‑0.90g/L。
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公开(公告)号：CN119979585A
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202411959265.4
申请日：2024-12-30
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌基因组低突变率整合位点和应用，属于生物技术领域。本发明利用基于枯草芽孢杆菌thyA及其内源启动子PthyA的波动测试，分析了枯草芽孢杆菌基因组不同整合位点的突变率，发现了一些低突变率整合位点，相对突变率均低于15％，且通过传代测试验证了其稳定性。在生物合成方面，本发明通过提高N‑乙酰神经氨酸途径基因neuB的遗传稳定性，提高了N‑乙酰神经氨酸的生产稳定性，使其在传代76代后仍能高效生产N‑乙酰神经氨酸。另外，通过提高T7RNA聚合酶的遗传稳定性，提高了T7表达系统的稳定性，使其在传代55代后仍然稳定。因此，低突变率位点对提高生物过程稳定、推动其工业应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN119955836A
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202411936300.0
申请日：2024-12-26
Abstract: 本发明涉及一种自发突变率降低的枯草芽孢杆菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过敲除枯草芽孢杆菌基因组中编码潜在易错DNA聚合酶的基因yolD、yozK和yozL，在不影响菌株比生长速率的情况下，构建得到一株自发突变率降低的枯草芽孢杆菌，该菌能够应用于提高游离或整合表达外源基因的表达稳定性。以该菌作为底盘菌株，通过整合表达的方式构建N‑乙酰神经氨酸合成通路，使其在传代59代后仍能高效生产N‑乙酰神经氨酸。以该菌作为底盘菌株，构建表达荧光报告基因的质粒，可在质粒不丢失的情况下保证质粒上的基因正确复制超过47代。本发明提供的枯草芽孢杆菌为提高遗传稳定性提供了高效的泛用型工具，能够应用于构建稳定表达的细胞工厂。
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