公开(公告)号：CN109136208A

公开(公告)日：2019-01-04

申请号：CN201811044790.8

申请日：2018-09-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 张梁 ,  於瑞梅 ,  辛瑜 ,  顾正华 ,  李由然 ,  丁重阳 ,  石贵阳

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70

CPC classification number: C12N9/485 ,  C07K2319/02 ,  C07K2319/21 ,  C12N15/70 ,  C12Y304/17002

Abstract: 本发明公开了一种羧肽酶B分泌表达的方法，所述方法包括如下步骤：(1)以信号肽OmpA、PelB、Endoxylanase和OmpT序列为出发序列，分别进行定点突变；(2)制备核苷酸序列SDB‑pCPB‑6×His；(3)制备重组表达载体；(4)将重组表达载体转化至宿主大肠杆菌E.coli BL21并诱导表达pCPB；(5)酶切上述pCPB并纯化CPB。本发明通过对信号肽的改造，能够将羧肽酶原B直接分泌到培养基中，相比于胞内和周质表达，不需要破碎细胞，回收与纯化更能容易操作。另外，培养基中空间足够大，利于重组蛋白的过量表达。