公开(公告)号：CN114107156B

公开(公告)日：2023-06-02

申请号：CN202111433195.5

申请日：2021-11-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘立明 ,  张芝兰 ,  高聪 ,  陈修来 ,  郭亮 ,  刘佳 ,  宋伟

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/06 ,  C12N9/02 ,  C12N9/88 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P7/44 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高效生产戊二酸的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。本发明通过分子生物学手段构建了一株双质粒重组菌，共表达芳香醛合酶基因AAS、胺氧化酶基因Mao以及醛脱氢酶基因Glox，将构建好的表达质粒导入大肠杆菌中构建得到重组细胞。再通过氨苄青霉素抗性和卡那霉素抗性组合平板筛选获得高效生产戊二酸的重组菌株。并通过优化底物浓度、菌体浓度，以及转化温度，实现了戊二酸的高效生产。在菌体浓度为30g/L、pH为8，并额外添加6mM NAD+的转化条件下反应30h，可将30g/L的L‑赖氨酸转化为19.65g的戊二酸，转化率可达到65.3％。

公开(公告)号：CN114107156A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111433195.5

申请日：2021-11-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘立明 ,  张芝兰 ,  高聪 ,  陈修来 ,  郭亮 ,  刘佳 ,  宋伟

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/06 ,  C12N9/02 ,  C12N9/88 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P7/44 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高效生产戊二酸的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。本发明通过分子生物学手段构建了一株双质粒重组菌，共表达芳香醛合酶基因AAS、胺氧化酶基因Mao以及醛脱氢酶基因Glox，将构建好的表达质粒导入大肠杆菌中构建得到重组细胞。再通过氨苄青霉素抗性和卡那霉素抗性组合平板筛选获得高效生产戊二酸的重组菌株。并通过优化底物浓度、菌体浓度，以及转化温度，实现了戊二酸的高效生产。在菌体浓度为30g/L、pH为8，并额外添加6mM NAD+的转化条件下反应30h，可将30g/L的L‑赖氨酸转化为19.65g的戊二酸，转化率可达到65.3％。