公开(公告)号：CN116606788A

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202310352887.X

申请日：2023-04-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 王小元 ,  刘紫维 ,  方宇 ,  李贺丹

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种DNA支架辅助大肠杆菌生产四氢嘧啶的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明通过对四氢嘧啶合成途径酶(EctA、EctB和EctC)与锌指结构域(ZFa、ZFb和ZFc)的融合，对表达质粒替换合适的复制子，对DNA支架结构选择合适的酶结合位点间距和酶结合方向、优化DNA支架的重复单元、调整DNA支架上不同酶结合位点的化学计量数，增加限速酶EctB的表达量以及改变发酵温度转换时间的方法，得到一株高产四氢嘧啶合成菌株MWZ003/pFV30。该菌株在发酵开始后4h转变温度的条件下，胞外四氢嘧啶产量达到22.79g·L‑1，接近1.92倍高于初始菌株MWZ003/pFV4，并且葡萄糖转化率为0.65g·g‑1。该发明提供了一种提高大肠杆菌中四氢嘧啶产量的新策略。