公开(公告)号：CN108949721B

公开(公告)日：2020-06-05

申请号：CN201810844860.1

申请日：2018-07-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 史劲松 ,  许正宏 ,  龚劲松 ,  侯海娟 ,  张晓梅 ,  李恒

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/75 ,  C12N15/81 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P13/06 ,  C12R1/125 ,  C12R1/84 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明涉及一种磷脂酶D，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还涉及一种编码磷脂酶D的基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了一种通过系统改造表达元件提高磷脂酶D表达水平的方法，该方法包括对信号肽、核糖体结合位点以及启动子的筛选与替换，构建的重组质粒转化至宿主菌中，重组菌株可成功表达磷脂酶D。本发明的磷脂酶D具有良好的转磷脂酰基能力，能以卵磷脂和L‑丝氨酸为底物合成产物磷脂酰丝氨酸。重组菌酶活稳定性较好，发酵周期短，为大规模工业化生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN110004124A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910148529.0

申请日：2019-02-28

Applicant: 江南大学 ,  广东双骏生物科技有限公司

Inventor： 龚劲松 ,  史劲松 ,  许正宏 ,  侯海娟 ,  陈杰鹏 ,  段丽丽

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12P13/06

Abstract: 本发明为一种磷脂酶D的编码基因及其表达和应用，提供了一种利用大肠杆菌E.coli BL21表达重组磷脂酶D并利用其产生磷脂酰丝氨酸的方法。该方法包括对重组质粒pET-28a(+)-sspld的构建、重组质粒转化至E.coli BL21及利用重组菌催化产生磷脂酰丝氨酸。重组菌株可成功表达磷脂酶D，酶活达到17.07U/mL。通过诱导条件优化，重组菌酶活最高可达38.58U/mL。经HPLC检测，该酶具有良好的转磷脂酰基能力，能以卵磷脂和L-丝氨酸为底物合成产物磷脂酰丝氨酸，转化率可达28％，产量达到1.34g/L。该重组磷脂酶D发酵周期短，催化性能良好，为其实际应用奠定了基础。

公开(公告)号：CN108949721A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810844860.1

申请日：2018-07-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 史劲松 ,  许正宏 ,  龚劲松 ,  侯海娟 ,  张晓梅 ,  李恒

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/75 ,  C12N15/81 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P13/06 ,  C12R1/125 ,  C12R1/84 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明涉及一种磷脂酶D，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还涉及一种编码磷脂酶D的基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了一种通过系统改造表达元件提高磷脂酶D表达水平的方法，该方法包括对信号肽、核糖体结合位点以及启动子的筛选与替换，构建的重组质粒转化至宿主菌中，重组菌株可成功表达磷脂酶D。本发明的磷脂酶D具有良好的转磷脂酰基能力，能以卵磷脂和L‑丝氨酸为底物合成产物磷脂酰丝氨酸。重组菌酶活稳定性较好，发酵周期短，为大规模工业化生产奠定了基础。