公开(公告)号：CN113215103A

公开(公告)日：2021-08-06

申请号：CN202110286330.1

申请日：2021-03-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 藤田盛久 ,  冷继雄 ,  高晓冬 ,  杨刚龙 ,  柳艺石 ,  任伟伟

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种生产杂合型N糖链修饰糖蛋白细胞株DFKO及其制备方法，其制备方法包括，将靶序列连接到CRISPR‑Cas9敲除系统的PX330‑EGFP质粒中，转染于HEK293野生型细胞中，转染后利用流式分选仪进行筛选富集和有限稀释，得到DFKO单克隆细胞。本发明在哺乳动物细胞HEK293中，利用CRISPR‑Cas9技术敲除N糖基化路径的MAN2A1、MAN2A2和FUT8基因，建立了三基因敲除细胞DFKO，该细胞可生产以杂合型且不含核心岩藻糖修饰为主要N糖链。该细胞株可应用于生产生物医药糖蛋白，能大大提高其稳定性和生物活性；特别地，由于DFKO细胞株丧失了核心岩藻糖修饰，利用该细胞株生产抗体，可以大大提高该抗体的ADCC效力。

公开(公告)号：CN113215103B

公开(公告)日：2023-03-31

申请号：CN202110286330.1

申请日：2021-03-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 藤田盛久 ,  冷继雄 ,  高晓冬 ,  杨刚龙 ,  柳艺石 ,  任伟伟

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种生产杂合型N糖链修饰糖蛋白细胞株DFKO及其制备方法，其制备方法包括，将靶序列连接到CRISPR‑Cas9敲除系统的PX330‑EGFP质粒中，转染于HEK293野生型细胞中，转染后利用流式分选仪进行筛选富集和有限稀释，得到DFKO单克隆细胞。本发明在哺乳动物细胞HEK293中，利用CRISPR‑Cas9技术敲除N糖基化路径的MAN2A1、MAN2A2和FUT8基因，建立了三基因敲除细胞DFKO，该细胞可生产以杂合型且不含核心岩藻糖修饰为主要N糖链。该细胞株可应用于生产生物医药糖蛋白，能大大提高其稳定性和生物活性；特别地，由于DFKO细胞株丧失了核心岩藻糖修饰，利用该细胞株生产抗体，可以大大提高该抗体的ADCC效力。