一种R-环结合蛋白GST-His6-1/2×HBD及全基因组R-环的检测方法

    公开(公告)号:CN112111470B

    公开(公告)日:2022-06-14

    申请号:CN202010946487.8

    申请日:2020-09-10

    Applicant: 武汉大学

    Abstract: 本发明提供一种R‑环结合蛋白GST‑His6‑1/2×HBD及全基因组R‑环的检测方法,GST‑His6‑1/2×HBD蛋白能够用于结合和定位R‑环,采用以下步骤制备:重组质粒GST‑His6‑1/2×HBD的构建和提取;将重组质粒转入T7Express lysY/Iq感受态细胞,在2×YT培养基中培养并用IPTG诱导蛋白表达;使用Ni‑NTA beads亲和纯化GST‑His6‑1/2×HBD蛋白。借助其对R‑环结构的特异性结合能力,运用靶向剪切及转座酶技术开发出少量细胞,操作简便,信噪比更高的R‑Loop CUT&TAG,以便更好地绘制内源性R‑环基因组图谱,阐释R‑环在基因组中的功能。

    一种R-环结合蛋白GST-His6-1/2×HBD及全基因组R-环的检测方法

    公开(公告)号:CN112111470A

    公开(公告)日:2020-12-22

    申请号:CN202010946487.8

    申请日:2020-09-10

    Applicant: 武汉大学

    Abstract: 本发明提供一种R‑环结合蛋白GST‑His6‑1/2×HBD及全基因组R‑环的检测方法,GST‑His6‑1/2×HBD蛋白能够用于结合和定位R‑环,采用以下步骤制备:重组质粒建G和S提T取‑H;i将s6重‑1/组2质×粒HB转D入的T构7Express lysY/Iq感受态细胞,在2×YT培养基中培养并用IPTG诱导蛋白表达;使用Ni‑NTA beads亲和纯化GST‑His6‑1/2×HBD蛋白。借助其对R‑环结构的特异性结合能力,运用靶向剪切及转座酶技术开发出少量细胞,操作简便,信噪比更高的R‑Loop CUT&TAG,以便更好地绘制内源性R‑环基因组图谱,阐释R‑环在基因组中的功能。

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