公开(公告)号：CN106324066A

公开(公告)日：2017-01-11

申请号：CN201610643262.9

申请日：2016-08-08

Applicant: 武汉大学

Inventor： 张志凌 ,  伍珍 ,  庞代文

IPC: G01N27/42 ,  G01N27/48

Abstract: 本发明公开了一种数字化单分子电化学检测碱性磷酸酶的方法。单个碱性磷酸酶（ALP）催化其底物对氨基磷酸酚（p-APP）产生还原性的对氨基苯酚（p-AP），p-AP可立即将Ag+还原成Ag0沉积到微电极表面，最后通过金属溶出伏安法得到电信号。本发明利用软光刻技术构建了彼此独立的纳米金微电极阵列，用于数字化分析的高通量平行实验。通过稀释酶浓度和控制反应液体积，保证每个微电极中至多含有单个酶分子，从而实现碱性磷酸酶的单分子检测。通过数字化分析的结合，ALP的检出限从50 aM降到1 aM，有效地提高了方法的灵敏性和可靠性，并成功用于肝癌细胞这一复杂体系中ALP的检测。该方法在探究分子的物理化学性质、单个生物分子检测及单细胞分析中有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN106324066B

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201610643262.9

申请日：2016-08-08

Applicant: 武汉大学

Inventor： 张志凌 ,  伍珍 ,  庞代文

IPC: G01N27/42 ,  G01N27/48

Abstract: 本发明公开了一种数字化单分子电化学检测碱性磷酸酶的方法。单个碱性磷酸酶（ALP）催化其底物对氨基磷酸酚（p‑APP）产生还原性的对氨基苯酚（p‑AP），p‑AP可立即将Ag+还原成Ag0沉积到微电极表面，最后通过金属溶出伏安法得到电信号。本发明利用软光刻技术构建了彼此独立的纳米金微电极阵列，用于数字化分析的高通量平行实验。通过稀释酶浓度和控制反应液体积，保证每个微电极中至多含有单个酶分子，从而实现碱性磷酸酶的单分子检测。通过数字化分析的结合，ALP的检出限从50 aM降到1 aM，有效地提高了方法的灵敏性和可靠性，并成功用于肝癌细胞这一复杂体系中ALP的检测。该方法在探究分子的物理化学性质、单个生物分子检测及单细胞分析中有广泛的应用前景。