公开(公告)号：CN102643791A

公开(公告)日：2012-08-22

申请号：CN201210114817.2

申请日：2012-04-18

Applicant: 暨南大学

Inventor： 顾军 ,  洪岸 ,  陈小佳

IPC: C12N9/64 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种蛇毒丝氨酸蛋白酶Harobin的纯化方法。本发明将表达Harobin的毕赤酵母发酵液离心，收集上清，用缓冲液A对上清透析；接着使用依次连接的强阳离子琼脂糖凝胶层析柱和强阴离子琼脂糖凝胶层析柱对透析后的上清进行联合层析，首先用缓冲液A洗至280nm吸收值为0，接着采用缓冲液B进行非特异蛋白洗脱，直至280nm吸收值是0并保持稳定；最后更换缓冲液C进行洗脱，收集缓冲液C洗脱的蛋白样品；将该蛋白样品滴入缓冲液D，使pH值调回7.8～8.2，用缓冲液E透析，冻干，得到Harobin。本发明简单，得到的蛇毒丝氨酸蛋白酶Harobin纯度非常高，可达到95％以上，得率85％以上。

公开(公告)号：CN102643791B

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201210114817.2

申请日：2012-04-18

Applicant: 暨南大学

Inventor： 顾军 ,  洪岸 ,  陈小佳

IPC: C12N9/64 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种蛇毒丝氨酸蛋白酶Harobin的纯化方法。本发明将表达Harobin的毕赤酵母发酵液离心，收集上清，用缓冲液A对上清透析；接着使用依次连接的强阳离子琼脂糖凝胶层析柱和强阴离子琼脂糖凝胶层析柱对透析后的上清进行联合层析，首先用缓冲液A洗至280nm吸收值为0，接着采用缓冲液B进行非特异蛋白洗脱，直至280nm吸收值是0并保持稳定；最后更换缓冲液C进行洗脱，收集缓冲液C洗脱的蛋白样品；将该蛋白样品滴入缓冲液D，使pH值调回7.8～8.2，用缓冲液E透析，冻干，得到Harobin。本发明简单，得到的蛇毒丝氨酸蛋白酶Harobin纯度非常高，可达到95％以上，得率85％以上。