公开(公告)号：CN120005891A

公开(公告)日：2025-05-16

申请号：CN202510269880.0

申请日：2025-03-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郭晓东 ,  马佳雨 ,  王梦芝 ,  张梦柯 ,  娄新徽 ,  温馨 ,  张跟喜 ,  张涛 ,  谢恺舟

IPC: C12N15/115 ,  C12N15/10 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了Capture‑SELEX技术体外筛选的萝卜硫素核酸适配体，利用Capture‑SELEX技术筛选萝卜硫素核酸适配体，并利用荧光法对候选序列亲和力测定，过程包括：cDNA与文库热处理形成pool‑cDNA复合物；利用萝卜硫素溶液对复合物进行正向筛选，靶标萝卜硫素与核酸适配体结合，核酸适配体空间构象变化导致文库与cDNA分离；利用qPCR监测筛选过程；对文库PCR扩增；制备单链，单链重新投入下一轮筛选；将12轮富集的文库进行高通量测序利用；挑选候选序列；3’端Dabcyl修饰的cDNA、5’端FAM荧光修饰的适配体和萝卜硫素孵育，测定核酸适配体亲和力，得到具有较高亲和力的核酸适配体序列。

公开(公告)号：CN120060267A

公开(公告)日：2025-05-30

申请号：CN202510270052.9

申请日：2025-03-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郭晓东 ,  温馨 ,  王梦芝 ,  张梦柯 ,  娄新徽 ,  马佳雨

IPC: C12N15/115 ,  C12N15/10 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了基于Capture‑SELEX技术筛选β‑ZOL适配体的方法，Capture‑SELEX将生物素标记的捕获链与随机文库杂交，将文库固定在链霉亲和素修饰的固相载体上。利用游离的靶标对文库进行洗脱，较弱或未结合的序列仍被保留在固相载体上。通过实时荧光定量PCR监控每轮筛选出单链DNA的物质的量，所有洗脱液通过PCR扩增，最后通过生物素‑链霉亲和素磁珠法制备单链DNA。重复上述步骤11轮，最后对富集的文库进行高通量测序，利用亲和力评价技术进行解离常数和特异性的测定，获得β‑ZOL的核酸适配体。