公开(公告)号：CN101575616B

公开(公告)日：2011-08-31

申请号：CN200710133953.5

申请日：2007-10-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 吴艳涛 ,  郦晓琼 ,  张小荣 ,  徐晓静

IPC: C12N15/869 ,  C12N15/44 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明涉及家禽用禽流感和马立克氏病二联活疫苗rMDV-HA病毒株及构建方法。本发明采用反转录-聚合酶链反应或聚合酶链反应扩增H5亚型禽流感病毒SY株血凝素基因、网状内皮增生症病毒LTR、筛选标志基因lac/smGFP和马立克氏病毒Rispens CVI 988疫苗株基因组外源基因并将其克隆到质粒载体中，得到重组质粒pHA、pLTR、ploxP-lac/smGFP-loxP、pUP和pDOWN，将转移载体pMHA质粒DNA与从马立克氏病毒Rispens CVI 988疫苗株感染细胞提取的DNA共转染鸡胚成纤维细胞，同源重组将外源基因插入到马立克氏病毒RispensCVI 988疫苗株基因组，得到带筛选标志基因的重组病毒rMDV-HA/GFP；由cre酶介导的loxP位点间序列重组去除rMDV-HA/GFP的筛选标志基因lac/smGFP，纯化后得到rMDV-HA病毒株。成本低、无污染、免疫期长，可作为禽流感和马立克氏病二联活疫苗病毒株。

公开(公告)号：CN101575616A

公开(公告)日：2009-11-11

申请号：CN200710133953.5

申请日：2007-10-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 吴艳涛 ,  郦晓琼 ,  张小荣 ,  徐晓静

IPC: C12N15/869 ,  C12N15/44 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明涉及家禽用禽流感和马立克氏病二联活疫苗rMDV－HA病毒株及构建方法。本发明采用反转录－聚合酶链反应或聚合酶链反应扩增H5亚型禽流感病毒SY株血凝素基因、网状内皮增生症病毒LTR、筛选标志基因lac/smGFP和马立克氏病毒Rispens CVI 988疫苗株基因组外源基因并将其克隆到质粒载体中，得到重组质粒pHA、pLTR、ploxP－lac/smGFP－loxP、pUP和pDOWN，将转移载体pMHA质粒DNA与从马立克氏病毒Rispens CVI 988疫苗株感染细胞提取的DNA共转染鸡胚成纤维细胞，同源重组将外源基因插入到马立克氏病毒RispensCVI 988疫苗株基因组，得到带筛选标志基因的重组病毒rMDV－HA/GFP；由cre酶介导的loxP位点间序列重组去除rMDV－HA/GFP的筛选标志基因lac/smGFP，纯化后得到rMDV－HA病毒株。成本低、无污染、免疫期长，可作为禽流感和马立克氏病二联活疫苗病毒株。