公开(公告)号：CN108949756B

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN201810941364.8

申请日：2018-08-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 崔恒宓 ,  薛松磊 ,  沈晖 ,  孙振 ,  欧阳娟 ,  徐慧

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼心脏特异表达模型的构建方法及相关载体。同源重组载体，包括插入原始载体的插入片段，插入片段包括斑马鱼心脏特异表达的启动子、融合LoxP位点序列的左侧同源臂和右侧同源臂、多克隆位点、内部核糖体进入位点、报告基因、转录终止信号片段；其中，所述启动子位于报告基因上游，所述终止信号位于报告基因下游，左侧同源臂位于启动子上游，右侧同源臂位于终止信号下游，同源臂的内侧含有LoxP序列，多克隆位点位于所述启动子和报告基因之间；左侧同源臂和右侧同源臂靶向斑马鱼色素基因。还提供了斑马鱼心脏特异表达模型的构建方法，本发明可用于快速建立斑马鱼心脏特异表达基因的转基因模型，同时可以调控插入片段的表达。

公开(公告)号：CN107881200A

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201711157630.X

申请日：2017-11-20

Applicant: 扬州大学

Inventor： 崔恒宓 ,  薛松磊 ,  孙振 ,  欧阳娟 ,  徐慧 ,  沈晖

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/89 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0275 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/03 ,  C12N9/22 ,  C12N15/89

Abstract: 本发明提供一种应用于模式动物斑马鱼转基因的快速筛选方法，包括以下步骤：1)构建含有强启动子、目的基因和标签基因的基因表达载体；2)设计出针对靶基因的特异性靶点，获得靶向SgRNA序列；3)在特异性靶点的基础上构建同源重组载体；4)将同源重组载体片段、SgRNA序列体外转录合成的mRNA，以及体外转录合成的nCas9-mRNA，三者共同注射斑马鱼受精卵；5)先筛选出靶基因功能缺失的斑马鱼；再通过标签基因进行第二次筛选，获得标签基因表达个体，从而获得表达目的基因表达个体。该方法可以对早期斑马幼鱼进行筛选，达到快速建立转基因模型目的。

公开(公告)号：CN109089970A

公开(公告)日：2018-12-28

申请号：CN201810659027.X

申请日：2018-06-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 崔恒宓 ,  欧阳娟 ,  薛松磊 ,  沈晖 ,  孙振 ,  徐慧

IPC: A01K61/59 ,  A01K61/17 ,  A01K61/10 ,  A23K50/80 ,  A23K10/22

Abstract: 本发明公开了一种改进的丰年虾孵化和收集方法，包括：对孵化器进行消毒清洗；向孵化器内加入孵化液，然后投入丰年虾的虾卵，于24℃～32℃下孵化20h～28h；其中，孵化液为浓度5‰～25‰海盐的水溶液，pH为7.0～10；孵化完成后，收集丰年虾幼虫；对收集的丰年虾幼虫进行消毒清洗，然后收集获得丰年虾。本发明针对目前丰年虾孵化条件有待优化、实验室孵化丰年虾尚未形成标准以及孵化后的丰年虾幼虫可能含有病原微生物等不足提供了解决方案，提供了一种改进的丰年虾孵化和收集方法，可获得高孵化率、高存活率、高获得率的丰年虾幼虫，且丰年虾孵化操作简单、孵化条件容易控制，孵化所需原材料环保易得并形成实验室丰年虾孵化标准。

公开(公告)号：CN108949756A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810941364.8

申请日：2018-08-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 崔恒宓 ,  薛松磊 ,  沈晖 ,  孙振 ,  欧阳娟 ,  徐慧

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/11 ,  A01K67/0278 ,  A01K2207/15 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0375 ,  C12N15/63 ,  C12N15/902

Abstract: 本发明公开了一种斑马鱼心脏特异表达模型的构建方法及相关载体。同源重组载体，包括插入原始载体的插入片段，插入片段包括斑马鱼心脏特异表达的启动子、融合LoxP位点序列的左侧同源臂和右侧同源臂、多克隆位点、内部核糖体进入位点、报告基因、转录终止信号片段；其中，所述启动子位于报告基因上游，所述终止信号位于报告基因下游，左侧同源臂位于启动子上游，右侧同源臂位于终止信号下游，同源臂的内侧含有LoxP序列，多克隆位点位于所述启动子和报告基因之间；左侧同源臂和右侧同源臂靶向斑马鱼色素基因。还提供了斑马鱼心脏特异表达模型的构建方法，本发明可用于快速建立斑马鱼心脏特异表达基因的转基因模型，同时可以调控插入片段的表达。

公开(公告)号：CN107881114A

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201711441939.1

申请日：2017-12-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 崔恒宓 ,  欧阳娟 ,  薛松磊 ,  沈晖 ,  孙振 ,  徐慧

IPC: C12N1/10 ,  C12R1/90

CPC classification number: C12N1/10

Abstract: 本发明提供了一种快速扩繁草履虫的方法，包括以下步骤：一种快速扩繁草履虫的方法，包括以下步骤：1)草履虫种源制备和保存：将种源保存于纯种保存培养液中得种源液，所述种源的草履虫密度>20个/mL；2)过渡培养：取种源液接种至过渡培养液中进行过渡培养；过渡培养至草履虫密度>300个/mL的扩繁培养标准；3)扩繁培养：将达到扩繁培养标准的过渡培养液接种至扩繁培养液中进行扩繁培养；扩繁培养至草履虫密度达到1500个/mL，用50目筛除去直径300um以上的杂质，得到可取用草履虫。该方法可以长期保存高活力种源和快速扩繁草履虫，满足了实验室短时间内获得大量草履虫的需求。