公开(公告)号：CN102634538A

公开(公告)日：2012-08-15

申请号：CN201210140915.3

申请日：2012-05-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李湘鸣 ,  谢阳酶 ,  李姗姗

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及一种红色荧光蛋白酵母报告载体及其构建方法。所说的红色荧光蛋白酵母报告载体pGPD/yDsRed是将SEQ ID No.1所示序列经BamHI和SalI双酶切后与pUC57载体相连得pUC57/yDsRed；将酵母强启动子GPD插入到pYestrp2载体中得到pGPD；然后再用BamHI和NotI对pUC57/yDsRed酶切，常规回收yDsRed目的片段，将目的片段插入到pGPD的相应酶切位点而获得。该载体转入酵母细胞后，在酵母启动子的驱动下，红色荧光蛋白可以有效地在酵母细胞中表达，因而可作为研究酵母生物学特点和酵母生物工程的理想工具。

公开(公告)号：CN101386880A

公开(公告)日：2009-03-18

申请号：CN200810155057.3

申请日：2008-10-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李湘鸣 ,  罗方妮

IPC: C12Q1/02 ,  C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及一种筛选雌激素类化合物的全酵母细胞传感器及其构建方法。所说的全酵母细胞传感器，是一种基因重组酵母，该基因重组酵母带有外源性人雌激素受体hER基因、雌激素效应元件ERE以及酵母增强绿色荧光蛋白yEGFP。yEGFP的表达受ERE的调控。其构建方法是：先构建hER cDNA酵母表达载体并用该载体转染酵母细胞；再构建ERE调控的yEGFP报告载体；然后将报告载体转化于上述hER cDNA基因转染的酵母细胞中，得到的转化子即本发明的发光全酵母细胞传感器。本发明以yEGFP为报告基因所构建的发光酵母细胞传感器，不需要添加任何底物和辅助试剂，安全，对环境无污染，且操作方便、时间短，费用低。

公开(公告)号：CN102533843A

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN201210053179.8

申请日：2012-03-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李湘鸣 ,  罗方妮 ,  葛宜枝

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明涉及一种可与V5抗原表位相融合的酵母表达载体及其构建方法。所说的V5抗原表位相融合的酵母表达载体，是一种含有V5“标签”（tag）酵母表达载体，该“标签”可通过一个柔性短肽Gly-Ile-与下游基因相融合，不会影响下游表达蛋白的生物活性。其构建方法是：以Invitrogen公司的pYestrp2载体作为基本框架，将酵母强启动子GPD插入到pYestrp2载体中，构建成酵母表达载体pGPD，再将5′和3′端具有BamHI和EcoRI黏性末端V5抗原表位DNA，插入到pGPD相应的酶切位点，构建成V5融合性酵母表达载体pGPDV5。pGPDV5可通过柔性短肽与下游基因相融合。由于V5抗体已经商品化，故本发明可以方便、特异性、有效地验证外源性基因的在酵母细胞中的表达，且费用相对较低。

公开(公告)号：CN101948805A

公开(公告)日：2011-01-19

申请号：CN201010293566.X

申请日：2010-09-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 徐海荣 ,  卜平 ,  李湘鸣

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及一种筛选化学预防剂的双信号转基因细胞传感器及其构建方法。该双信号转基因细胞传感器带有抗氧化反应元件ARE、TK启动子、增强绿色荧光蛋白EGFP以及红色荧光蛋白DsRed。EGFP的表达受ARE的调控。其构建方法是：先构建由TK启动子启动以及上游有4个ARE重复序列调控的真核报告载体；再将DsRed及其启动子片段插入该载体构建双信号报告载体；然后将报告载体转染HepG2细胞，得到的转基因细胞即本发明的双信号转基因细胞传感器。本发明以EGFP为报告基因，以DsRed为内参照所构建的双信号转基因细胞传感器，不需要添加任何底物和辅助试剂，安全，对环境无污染，且操作方便、时间短，费用低。