公开(公告)号：CN108611313B

公开(公告)日：2021-03-05

申请号：CN201810438172.5

申请日：2018-05-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  孙娅 ,  刘正阳 ,  张盼盼 ,  黄旭

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明涉及从芜菁柱头分离乳突细胞的方法，具体涉及植物组织酶解分离和获取完整具有活力的乳突细胞的方法，属于生物化学及细胞生物学领域。本发明主要采用了独创的酶解液首次分离出乳突细胞，步骤主要包括采集成熟柱头、柱头酶解液培养、涡旋震荡以及离心分离，获得完整的具有活力的乳突细胞，具有步骤简单、操作方便、耗时较短等优点，并且最终分离出的乳突细胞具有较高纯度，适合于乳突细胞的蛋白质组学和基因组学实验研究。

公开(公告)号：CN105463074B

公开(公告)日：2018-10-16

申请号：CN201510796193.0

申请日：2015-11-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  刘正阳 ,  赵宪坤 ,  张盼盼 ,  高季平

IPC: C12Q1/6804 ,  C12Q1/6858

Abstract: 本发明是涉及一种快速测定脱氧核糖核酸甲基化率的方法，属于分子生物学及遗传学领域。本发明主要是采用了新的DNA序列检测方法。步骤主要包括引物和探针设计，重亚硫酸盐转化、序列扩增、探针杂交和探针检测(采用检测探针和竞争探针同时杂交提高检测精度)和DNA甲基化率确定，在效率上远远高于目前的方法，时间短，价格也便宜，具有广阔应用前景。

公开(公告)号：CN108611313A

公开(公告)日：2018-10-02

申请号：CN201810438172.5

申请日：2018-05-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  孙娅 ,  刘正阳 ,  张盼盼 ,  黄旭

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明涉及从芜菁柱头分离乳突细胞的方法，具体涉及植物组织酶解分离和获取完整具有活力的乳突细胞的方法，属于生物化学及细胞生物学领域。本发明主要采用了独创的酶解液首次分离出乳突细胞，步骤主要包括采集成熟柱头、柱头酶解液培养、涡旋震荡以及离心分离，获得完整的具有活力的乳突细胞，具有步骤简单、操作方便、耗时较短等优点，并且最终分离出的乳突细胞具有较高纯度，适合于乳突细胞的蛋白质组学和基因组学实验研究。

公开(公告)号：CN107267507A

公开(公告)日：2017-10-20

申请号：CN201710224342.5

申请日：2017-04-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  黄旭 ,  宋平平 ,  孙娅 ,  刘正阳 ,  张盼盼

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90

CPC classification number: C12N15/1137 ,  C12N15/87 ,  C12N2310/531

Abstract: 本发明公开了一种抑制芸苔属植物花柱NADPH氧化酶基因表达的方法。利用已知的NADPH氧化酶基因(Genbank登陆号：XM_009114548.2)在其二级结构的可能结合位点处设计出互补核苷酸链，添加至培养基中。将芸苔属植物花柱放入培养基中培养4小时，让其充分吸收互补核苷酸链。提取花柱RNA，反转录成cDNA后，通过荧光定量PCR检测出花柱中NADPH氧化酶基因表达量显著减少，证明该互补核苷酸链可以抑制该基因表达。

公开(公告)号：CN107114029A

公开(公告)日：2017-09-01

申请号：CN201710224946.X

申请日：2017-04-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  刘正阳 ,  张盼盼 ,  黄旭 ,  孙娅

IPC: A01C1/00 ,  A01N43/12 ,  A01N45/00 ,  A01N43/16 ,  A01P21/00

Abstract: 本发明公开了一种快速解除杜梨种子休眠的方法。涉及激素处理和催芽，属于植物生理和生产栽培领域。本发明通过去除种子的种皮，用脱脂棉包裹，再用赤霉素和葡萄糖的混合液处理去除种皮的种子，利用合适的外源激素以及脱脂棉的保湿性打破种子休眠。本方法具有步骤简单、损耗少、耗时较短等优点，解除休眠的效果好，发霉的种子较少，萌芽的种子可用于播种或后续实验。

公开(公告)号：CN106987592A

公开(公告)日：2017-07-28

申请号：CN201710224701.7

申请日：2017-04-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  孙娅 ,  刘正阳 ,  张盼盼 ,  黄旭

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明公开了一种抑制种子赤霉素合成基因表达的方法。涉及互补链的设计、脱脂棉包裹的种子的培养，属于发育生物学及细胞生物学领域。使用互补链抑制梨种子赤霉素合成基因表达的方法，可以更好了解到缺少赤霉素对种子萌芽率的影响，更好的研究赤霉素对解除种子休眠的作用。方法较简便，易于操作和实际应用。可以广泛用于不同植物种子其他基因表达的抑制。

公开(公告)号：CN105602885A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201510797285.0

申请日：2015-11-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  高季平 ,  叶蕴灵 ,  赵贝贝 ,  张盼盼

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明涉及一种分离纯化植物绒毡层组织的方法，属于发育生物学及细胞生物学领域。本发明通过对花药的采集、清洗液的制备、酶解液的制备、花药前处理、去除花药小孢子、绒毡层细胞的分离和收集步骤。利用合适的酶种类及浓度酶解分离绒毡层组织，再通过过滤离心纯化收集绒毡层。本方法具有步骤简单、操作方便、耗时较短等优点，分离效率好，得到的绒毡层组织可用于后续实验。

公开(公告)号：CN106987592B

公开(公告)日：2020-05-19

申请号：CN201710224701.7

申请日：2017-04-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  孙娅 ,  刘正阳 ,  张盼盼 ,  黄旭

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明公开了一种抑制种子赤霉素合成基因表达的方法。涉及互补链的设计、脱脂棉包裹的种子的培养，属于发育生物学及细胞生物学领域。使用互补链抑制梨种子赤霉素合成基因表达的方法，可以更好了解到缺少赤霉素对种子萌芽率的影响，更好的研究赤霉素对解除种子休眠的作用。方法较简便，易于操作和实际应用。可以广泛用于不同植物种子其他基因表达的抑制。

公开(公告)号：CN105602885B

公开(公告)日：2018-12-11

申请号：CN201510797285.0

申请日：2015-11-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  高季平 ,  叶蕴灵 ,  赵贝贝 ,  张盼盼

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明涉及一种分离纯化植物绒毡层组织的方法，属于发育生物学及细胞生物学领域。本发明通过对花药的采集、清洗液的制备、酶解液的制备、花药前处理、去除花药小孢子、绒毡层细胞的分离和收集步骤。利用合适的酶种类及浓度酶解分离绒毡层组织，再通过过滤离心纯化收集绒毡层。本方法具有步骤简单、操作方便、耗时较短等优点，分离效率好，得到的绒毡层组织可用于后续实验。

公开(公告)号：CN106973581A

公开(公告)日：2017-07-25

申请号：CN201710224699.3

申请日：2017-04-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 王春雷 ,  张盼盼 ,  宋平平 ,  刘正阳 ,  孙娅 ,  黄旭

IPC: A01C1/00 ,  A01C1/02 ,  A01C1/08

CPC classification number: A01C1/00 ,  A01C1/02 ,  A01C1/08

Abstract: 本发明公开了一种解除种子休眠的方法。涉及种子吸胀、露白和萌芽，属于植物生理学和生产栽培领域。本发明通过前期浸泡种子，接着用脱脂棉包裹在种皮上，利用脱脂棉保湿性能好且通透性好的特点，再通过低温层积彻底打破梨种子休眠。本方法具有易于操作、步骤简单、便于观察等优点，打破休眠的效果好，且用脱脂棉包裹方便加入化学药剂和激素以研究它们对解除种子休眠的作用。