公开(公告)号：CN117025847A

公开(公告)日：2023-11-10

申请号：CN202311044438.5

申请日：2023-08-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郑王龙 ,  张德胜 ,  朱建中

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了基于结构蛋白基因D117L的CRISPR‑LwCas13a侧向流试纸条快速可视化检测非洲猪瘟病毒的方法，首先RPA扩增待测样品的产物经体外转录获得靶标RNA；合成生物素标记的ssRNA探针；建立CRISPR‑LwCas13a反应体系；将靶标RNA加入到反应体系中在室温下进行反应获得反应液；将试纸条插入到反应液中，待试纸条的结合垫区域被反应液完全浸透，取出试纸条根据试纸条上的测试线是否存在金线判断检测结果。本发明使用D117L基因作为检测靶标并结合CRISPR‑Cas13a检测非洲猪瘟病毒，针对p17基因D117L的保守序列设计了特异性crRNA、RPA引物和探针组合，测试RPA‑LwCas13a‑LFS检测方法敏感性和特异性。

公开(公告)号：CN116732238A

公开(公告)日：2023-09-12

申请号：CN202211532955.2

申请日：2022-12-01

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郑王龙 ,  张德胜 ,  朱建中

IPC: C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6806 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种CRISPR‑Cas12a侧向流试纸条快速可视化检测非洲猪瘟病毒的方法，首先设计并合成金颗粒生物素单链DNA探针；其次建立CRISPR‑Cas12a反应体系，所述反应体系包括：LbCas12a、D117L‑crRNA、RNase抑制剂、检测缓冲液和金颗粒生物素单链DNA探针；然后将靶标DNA加入到CRISPR‑Cas12a反应体系中进行反应，得到CRISPR‑Cas12a反应液；最后将胶体金试纸条插入到CRISPR‑Cas12a反应液中，观察检测结果。本发明的ASFV检测方法简单、快速灵敏且特异性强，显示出了现场检测ASFV的潜力。