公开(公告)号：CN108384865A

公开(公告)日：2018-08-10

申请号：CN201810123080.8

申请日：2018-02-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 朱国强 ,  周明旭 ,  夏芃芃 ,  羊扬 ,  丁雪燕 ,  孟霞 ,  王建业 ,  朱礼倩 ,  石宝兰 ,  张建军 ,  张伟

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q2600/158

Abstract: 本发明涉及Alpha菌毛基因在仔猪腹泻致病性大肠杆菌监测、鉴别中的应用。本发明还提供一对用于检测仔猪腹泻致病性大肠杆菌的特异性引物和试剂盒。鉴定引物用于猪场临床环境中致仔猪腹泻大肠杆菌的快速检测；对从饲料、饮水(或污水)、扬尘和粪便中分离细菌为模板，利用这对引物进行PCR扩增，如果是致仔猪腹泻致病性大肠杆菌，则PCR扩增为预期阳性；如果是其他非致病大肠杆菌，如沙门菌、魏氏梭菌等其他菌属，则结果为阴性。本发明基于不同菌属或者不同表型大肠杆菌中Alpha菌毛基因的分布差异，以及Alpha菌毛cblB基因序列保守性的特点，为临床快速区分和鉴定致仔猪腹泻大肠杆菌提供新的方法和选择。

公开(公告)号：CN108315447A

公开(公告)日：2018-07-24

申请号：CN201810124793.6

申请日：2018-02-07

Applicant: 扬州大学 ,  国药集团扬州威克生物工程有限公司

Inventor： 朱国强 ,  周明旭 ,  夏芃芃 ,  羊扬 ,  孟霞 ,  王建业 ,  朱礼倩 ,  张信军 ,  石宝兰 ,  张建军 ,  张伟

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12Q1/689 ,  C12Q2600/158

Abstract: 本发明涉及产肠毒素大肠杆菌I型菌毛基因的应用。本发明公开了fimA序列中第71位的一段特有基序AAACTA作为监测、鉴别产肠毒素大肠杆菌的分子标记的应用。并设计一对特异性鉴定引物，可以在猪场临床环境中快速检测产肠毒素大肠杆菌。通过这对引物对分离的细菌DNA模板进行PCR扩增，如果存在产肠毒素大肠杆菌，则可以扩增预期的阳性条带；如果是其他非产肠毒素大肠杆菌病原菌，非致病大肠杆菌或引起腹泻的其他病原菌如沙门菌、魏氏梭菌等其他菌属，则结果阴性。本发明基于不同菌属I型菌毛FimA基因序列的差异性，发现在产肠毒素大肠杆菌fimA存在的特有的一段序列，设计出为临床快速区分和鉴定产肠毒素大肠杆菌提供新策略和方法。

公开(公告)号：CN103740747A

公开(公告)日：2014-04-23

申请号：CN201410045786.9

申请日：2014-02-08

Applicant: 扬州大学

Inventor： 朱国强 ,  朱军 ,  杨颖 ,  夏芃芃 ,  羊扬 ,  周明旭 ,  朱晓芳

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/20

Abstract: 本发明涉及一种使用自杀性载体去除大肠杆菌Nissle菌内隐秘质粒的方法，该方法是将自杀性载体与待去除的隐秘质粒构建成重组自杀质粒，所述自杀性载体具有抗性筛选标记和自杀载体特性；用构建的重组自杀质粒转化大肠杆菌Nissle，通过抗性筛选得到仅携带重组自杀质粒的大肠杆菌Nissle；再利用自杀性载体的自杀特性筛选出丢失重组自杀质粒的大肠杆菌Nissle，从而获得去除了隐秘质粒的大肠杆菌Nissle。本发明不存在常规使用的化学、物理方法对宿主菌造成的不良影响。本方法不会对宿主菌的基因组造成影响，亦不会影响宿主菌已知的生物学特性。