公开(公告)号：CN101289671B

公开(公告)日：2010-12-22

申请号：CN200810123956.5

申请日：2008-05-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  高波 ,  谢飞 ,  王宵燕 ,  陈国宏 ,  孙丽亚 ,  赵芹 ,  吴晗

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/89 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种转基因动物的制备方法。具体是先构建含目标基因cDNA的转基因表达盒，再将其插入睡美人转座子载体中获得含转基因表达盒的睡美人转座子表达载体，然后使用睡美人转座系统介导，采用双侧睾丸多点注射法，将含转基因表达盒的睡美人转座子表达质粒和睡美人转座酶表达质粒注射雄性动物体内；再与雌性动物交配，动物分娩后，利用聚合酶链式反应和Southern印迹技术分析确定转基因阳性个体。本发明在转基因动物的制备过程中使用“睡美人”转座系统介导，采用双侧睾丸三次多点注射法，所建立的转基因动物制备方法具有阳性率高、节省时间、试验成本低、实用、操作简单等优势。

公开(公告)号：CN101285102A

公开(公告)日：2008-10-15

申请号：CN200810098906.6

申请日：2008-05-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  高波 ,  王宵燕 ,  陈国宏 ,  谢飞 ,  孙丽亚 ,  赵芹 ,  吴晗

IPC: C12Q1/68 ,  G01N33/53 ,  G01N21/64 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明公开了一种猪精囊腺生物反应器表达特性研究的检测体系。技术方案利用构建的猪精囊腺生物反应器表达元件，在小鼠体内进行暂态表达，进行猪精囊腺生物反应器转基因构件的表达水平、组织特异性、表达产物活性研究，为真正的转基因猪精囊腺生物反应器研究提供实验依据。与同类技术相比，该发明具有经济、快速、实用的特点。

公开(公告)号：CN101279097A

公开(公告)日：2008-10-08

申请号：CN200810123602.0

申请日：2008-05-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  高波 ,  谢飞 ,  王宵燕 ,  陈国宏 ,  孙丽亚 ,  赵芹 ,  吴晗

IPC: A61K48/00 ,  C12N15/11 ,  C12N15/79

Abstract: 本发明公开了一种基因免疫方法。所说的方法是以常规方法克隆目标基因cDNA，然后构建含目标抗原cDNA的真核表达载体重组质粒，以转座酶质粒作为免疫佐剂；将真核表达载体重组质粒和转座酶质粒按4∶1混匀，然后用基因包裹剂PEI按PEI∶质粒＝2∶1包裹，按每克体重注射1微克质粒的剂量为进行动物免疫。该方法能显著促进抗体效价的提高，建立了一种简单、经济、实用、高效的抗体制备方法，可以进行多种商业化抗体的生产。

公开(公告)号：CN101289671A

公开(公告)日：2008-10-22

申请号：CN200810123956.5

申请日：2008-05-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  高波 ,  谢飞 ,  王宵燕 ,  陈国宏 ,  孙丽亚 ,  赵芹 ,  吴晗

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/89 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种转基因动物的制备方法。具体是先构建含目标基因cDNA的转基因表达盒，再将其插入睡美人转座子载体中获得含转基因表达盒的睡美人转座子表达载体，然后使用睡美人转座系统介导，采用双侧睾丸多点注射法，将含转基因表达盒的睡美人转座子表达质粒和睡美人转座酶表达质粒注射雄性动物体内；再与雌性动物交配，动物分娩后，利用聚合酶链式反应和Southern印迹技术分析确定转基因阳性个体。本发明在转基因动物的制备过程中使用“睡美人”转座系统介导，采用双侧睾丸三次多点注射法，所建立的转基因动物制备方法具有阳性率高、节省时间、试验成本低、实用、操作简单等优势。

公开(公告)号：CN102978202A

公开(公告)日：2013-03-20

申请号：CN201210383179.4

申请日：2012-10-10

Applicant: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ,  扬州大学

Inventor： 李奎 ,  宋成义 ,  吴晗 ,  鞠辉明 ,  白立景

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明为一种猪骨骼肌中特异过表达猪内源IGF1(C1：Ea)基因的安全型表达载体。该载体包含猪内源性序列sk-α-actinPromoter/IGF1(C1:Ea)/sk-α-actin3’UTR/SV40增强子串联组成的表达盒。本发明的表达载体在细胞水平上验证了骨骼肌特异sk-α-actin启动子在成肌细胞中能高效表达，在具有成肌分化潜能的PEF细胞中仅低水平表达而在其他类型细胞中不表达。本发明中构建的载体制备转基因小鼠，通过定量PCR和WesternBlot检测出转基因小鼠骨骼肌中IGF1基因的mRNA和蛋白表达水平分别为野生型小鼠的15倍和3.5倍，并且仅在骨骼肌中高效表达。

公开(公告)号：CN101279097B

公开(公告)日：2010-08-18

申请号：CN200810123602.0

申请日：2008-05-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 宋成义 ,  高波 ,  谢飞 ,  王宵燕 ,  陈国宏 ,  孙丽亚 ,  赵芹 ,  吴晗

IPC: A61K48/00 ,  C12N15/11 ,  C12N15/79

Abstract: 本发明公开了一种基因免疫方法。所说的方法是以常规方法克隆目标基因cDNA，然后构建含目标抗原cDNA的真核表达载体重组质粒，以转座酶质粒作为免疫佐剂；将真核表达载体重组质粒和转座酶质粒按4∶1混匀，然后用基因包裹剂PEI按PEI∶质粒＝2∶1包裹，按每克体重注射1微克质粒的剂量为进行动物免疫。该方法能显著促进抗体效价的提高，建立了一种简单、经济、实用、高效的抗体制备方法，可以进行多种商业化抗体的生产。