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公开(公告)号：CN111235185B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN201811433336.1
申请日：2018-11-28
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司 , 康码(上海)海洋科技有限公司
Abstract: 本发明公开一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法，该方法为：步骤1，基因改造：通过基因改造使出发菌株染色体上LAC4基因无法表达正常功能的LAC4蛋白，得到LAC4基因缺陷的菌株，该LAC4基因缺陷的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上无法正常生长；步骤2，基因恢复：将目标基因与正常的LAC4基因连接构成供体片段，将此供体片段转入前述LAC4基因缺陷的菌株，使LAC4基因恢复正常的表达功能；步骤3，基因恢复后的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上进行培养，能够正常生长的菌株为LAC4基因恢复的菌株，也是目标基因正常插入的菌株。相比无筛选功能的CRISPR/Cas9系统，本系统通过筛选可剔除绝大部分基因编辑阴性的菌株，大大提高筛选阳性率，可基本无需PCR筛选，节省时间和成本。
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公开(公告)号：CN111378706B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201811608353.4
申请日：2018-12-27
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种改变体外无细胞蛋白合成体系的蛋白合成能力的方法，其在真核生物的基因组中通过基因编辑技术将Edc3基因敲除，并将其用于体外无细胞蛋白合成体系。经试验验证，Edc3基因敲除能显著提高无细胞蛋白合成体系的蛋白表达能力。同时，本发明提供包含利用该基因改造方法进行改造的基因工程细胞的无细胞蛋白质合成体系及其蛋白合成方法及相应的试剂盒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111378706A
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN201811608353.4
申请日：2018-12-27
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种改变体外无细胞蛋白合成体系的蛋白合成能力的方法，其在真核生物的基因组中通过基因编辑技术将Edc3基因敲除，并将其用于体外无细胞蛋白合成体系。经试验验证，Edc3基因敲除能显著提高无细胞蛋白合成体系的蛋白表达能力。同时，本发明提供包含利用该基因改造方法进行改造的基因工程细胞的无细胞蛋白质合成体系及其蛋白合成方法及相应的试剂盒。
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公开(公告)号：CN111254128A
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201811452075.8
申请日：2018-11-30
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种真核生物的基因改造方法，通过基因编辑对3’5’-环腺苷酸依赖的蛋白激酶，即蛋白激酶A催化亚基的TPK1编码基因进行碱基突变，从而将该真核生物的TPK1氨基酸序列中与酿酒酵母TPK1氨基酸序列179号位点相对应的丝氨酸突变为天冬氨酸，即237号位点的丝氨酸突变为天冬氨酸。该改造方法不仅能够增强真核体外生物合成体系起始蛋白质翻译效率，更主要的是能够增加体外生物合成体系针对不同蛋白质合成的可能性。同时，本发明提供包含利用该基因改造方法进行改造的基因工程细胞，以及包含该基因工程细胞制备的细胞提取物的真核无细胞蛋白质合成体系。
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公开(公告)号：CN111254127A
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201811451589.1
申请日：2018-11-30
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种真核生物的基因改造方法，通过基因编辑对3’5’-环腺苷酸依赖的蛋白激酶，即蛋白激酶A催化亚基的TPK2编码基因进行碱基突变，从而将该真核生物的TPK2氨基酸序列中与酿酒酵母TPK1氨基酸序列179号位点相对应的丝氨酸突变为天冬氨酸，即154号位点的丝氨酸突变为天冬氨酸。该改造方法不仅能够增强真核体外生物合成体系起始蛋白质翻译效率，更主要的是能够增加体外生物合成体系针对不同蛋白质合成的可能性。同时，本发明提供包含利用该基因改造方法进行改造的基因工程细胞，以及包含该基因工程细胞制备的细胞提取物的真核无细胞蛋白质合成体系。
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公开(公告)号：CN111254127B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN201811451589.1
申请日：2018-11-30
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种真核生物的基因改造方法，通过基因编辑对3’5’‑环腺苷酸依赖的蛋白激酶，即蛋白激酶A催化亚基的TPK2编码基因进行碱基突变，从而将该真核生物的TPK2氨基酸序列中与酿酒酵母TPK1氨基酸序列179号位点相对应的丝氨酸突变为天冬氨酸，即154号位点的丝氨酸突变为天冬氨酸。该改造方法不仅能够增强真核体外生物合成体系起始蛋白质翻译效率，更主要的是能够增加体外生物合成体系针对不同蛋白质合成的可能性。同时，本发明提供包含利用该基因改造方法进行改造的基因工程细胞，以及包含该基因工程细胞制备的细胞提取物的真核无细胞蛋白质合成体系。
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公开(公告)号：CN111235185A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN201811433336.1
申请日：2018-11-28
Applicant: 康码(上海)生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法，该方法为：步骤1，基因改造：通过基因改造使出发菌株染色体上LAC4基因无法表达正常功能的LAC4蛋白，得到LAC4基因缺陷的菌株，该LAC4基因缺陷的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上无法正常生长；步骤2，基因恢复：将目标基因与正常的LAC4基因连接构成供体片段，将此供体片段转入前述LAC4基因缺陷的菌株，使LAC4基因恢复正常的表达功能；步骤3，基因恢复后的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上进行培养，能够正常生长的菌株为LAC4基因恢复的菌株，也是目标基因正常插入的菌株。相比无筛选功能的CRISPR/Cas9系统，本系统通过筛选可剔除绝大部分基因编辑阴性的菌株，大大提高筛选阳性率，可基本无需PCR筛选，节省时间和成本。
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