公开(公告)号：CN107475209A

公开(公告)日：2017-12-15

申请号：CN201710640633.2

申请日：2017-07-31

Applicant: 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) ,  广东环凯微生物科技有限公司

Inventor： 吴清平 ,  罗展浩 ,  张菊梅 ,  丁郁 ,  李程思 ,  吴慧清 ,  蔡芷荷 ,  卢勉飞

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

CPC classification number: C12N9/0069 ,  C12N15/815 ,  C12Y113/12007

Abstract: 本发明公开了一种荧光素酶的制备方法，本发明方法包括：荧光素酶基因的克隆与表达载体的构建、荧光素酶表达载体转化毕赤酵母和筛选转化子、荧光素酶的表达及粗酶液的提取、荧光素酶的分离和纯化。本发明荧光素酶的制备方法简便、高效，在菌体培养过程中，具有培养条件要求简单、无需添加抗生素维持基因的稳定性、诱导剂成本低、培养周期短等优点。本发明制备方法可生产大小为70kDa且带有α-因子分泌肽的融合荧光素酶。本发明制备方法中，胞内胞外的粗酶液均具有较好的酶活性，且粗酶纯化后的比活可达7.0×108RLU/mg，摇瓶发酵产量可达到48mg/L，为荧光素酶的大量生产提供了新的方法，具有良好的应用前景和市场价值。