-
公开(公告)号:CN108342382A
公开(公告)日:2018-07-31
申请号:CN201810093348.8
申请日:2018-01-30
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
IPC: C12N15/10 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明公开了一种核酸快速提取方法,包括以下步骤:1)将样品置入含有提取溶液的收集管,分散裂解均匀;所述提取溶液中含有Tris缓冲液;2)将吸附膜浸渍于提取溶液;所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜;3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜,将吸附膜置于洗脱液或PCR反应液中释放核酸。本发明同时提供与上述方法对应的试验盒。本发明以固相提取的原理,在弱碱性条件下,使带负电的核酸吸附于经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜,再通过洗脱液进行洗脱,以快速地获得核酸;该方法提取过程快速、杂质少、对温度的限制性小、核酸不易解离,适用于户外等条件简陋的场合。
-
公开(公告)号:CN111286559A
公开(公告)日:2020-06-16
申请号:CN202010150041.4
申请日:2020-03-06
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
Abstract: 本发明属于病毒检测技术领域,具体涉及检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒。具体地,所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO:4~5所示的引物对;所述探针包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的探针和核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示的探针。本发明的试剂盒包括上述引物和探针,通过设置反应抑制对照,可指示核酸提取及PCR过程中可能的PCR反应抑制物,监控PCR扩增质量;本发明试剂盒制造方法简便、兼容常规实时荧光PCR检测设备,在快速荧光PCR设备上可实现“极速扩增”,约20分钟完成PCR检测。
-
公开(公告)号:CN108251445A
公开(公告)日:2018-07-06
申请号:CN201711481052.5
申请日:2017-12-29
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
IPC: C12N15/70 , C12P21/02 , C07K14/14 , C07K1/34 , C07K1/113 , G01N33/68 , G01N33/569 , A61K39/15 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒II型S9及S10重组蛋白规模化的制备工艺及应用,制备工艺包括重组标记蛋白工程菌构建和发酵的步骤、切向流微滤回收蛋白包涵体的步骤、rGCRV2 S9和rGCRV2 S10蛋白变性与连续复性。本发明方法主要使用切向流微滤和超滤技术对各步骤上清与沉淀分离,无需进行大体积样品离心;由大肠杆菌表达的包涵体形式的S9及S10重组蛋白经过变性和连续复性,可去除内毒素和菌体蛋白,复性后重组蛋白生物学活性良好。关键是本发明的制备工艺操作简单、整个过程中,无需进行大体积样品离心,降低了工作强度,适合大规模工业生产。
-
公开(公告)号:CN108342382B
公开(公告)日:2020-12-15
申请号:CN201810093348.8
申请日:2018-01-30
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
IPC: C12N15/10 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明公开了一种核酸快速提取方法,包括以下步骤:1)将样品置入含有提取溶液的收集管,分散裂解均匀;所述提取溶液中含有Tris缓冲液;2)将吸附膜浸渍于提取溶液;所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜;3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜,将吸附膜置于洗脱液或PCR反应液中释放核酸。本发明同时提供与上述方法对应的试验盒。本发明以固相提取的原理,在弱碱性条件下,使带负电的核酸吸附于经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜,再通过洗脱液进行洗脱,以快速地获得核酸;该方法提取过程快速、杂质少、对温度的限制性小、核酸不易解离,适用于户外等条件简陋的场合。
-
公开(公告)号:CN107245477A
公开(公告)日:2017-10-13
申请号:CN201710439243.9
申请日:2017-06-06
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
CPC classification number: C12N7/00 , C07K14/005 , C12N15/70 , C12N2750/10022 , C12N2750/10023 , C12N2750/10051
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备方法,包括猪圆环病毒2型Cap重组蛋白包涵体的制备步骤:将编码Cap蛋白的PCV2‑ORF2基因全长DNA或已去掉编码Cap蛋白N’端信号肽碱基序列的PCV2‑ORF2 DNA片段插入原核表达载体中,转化大肠杆菌表达菌,诱导表达Cap重组蛋白;和Cap重组蛋白包涵体变性步骤;和溶液置换及蛋白复性步骤:采用恒体积透析法对变性蛋白溶液进行溶液置换与蛋白复性;和病毒样颗粒组装和回收步骤:使用中空纤维膜或膜包,以PBS对回收溶液进行超滤,浓缩;制备方法中蛋白复性效率高,可将包涵体持续、大量地制备得到病毒样颗粒,适合工业化生产。
-
公开(公告)号:CN106244728A
公开(公告)日:2016-12-21
申请号:CN201610710904.2
申请日:2016-08-23
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
Abstract: 本发明公开一种PEDV和TGEV双重RT-PCR检测方法及其探针引物组合与试剂盒。具体地,该PEDV上、下游引物和探针分别如SEQ ID No.1-3所示,该TGEV上、下游引物和探针分别如SEQ ID No.4-6所示。含有该PEDV和TGEV双重RT-PCR检测探针引物组合的试剂盒可高效、高准确率地检测PEDV和TGEV病毒,同时可判定哪种病毒起主要作用,为实现临床早期诊断和及时制定治疗方案、减少死亡率及后遗症成为可能。
-
公开(公告)号:CN118530951A
公开(公告)日:2024-08-23
申请号:CN202410688894.1
申请日:2024-05-30
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
IPC: C12N7/04 , C12N7/01 , C12N15/40 , C12N15/52 , C12N15/70 , C12Q1/6806 , C12Q1/70 , C12R1/93 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域,公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用,具体公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒的制备方法。本发明通过分别扩增PRRSV‑1和PRRSV‑2的M基因,进行纯化回收,连接内含MS2成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白的pET28b载体,通过转化至BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达,利用PEG6000沉淀法纯化,制备得到猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和美洲型MS2装甲病毒样颗粒,可作为核酸检测的质控品或定量标准品。
-
公开(公告)号:CN114686612B
公开(公告)日:2024-05-07
申请号:CN202210444378.5
申请日:2022-04-26
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
Abstract: 本发明属于生物检测技术领域,公开了一种罗非鱼链球菌病双重荧光PCR检测引物探针组及冻干型试剂盒,具体公开了一种试剂,包括引物组和/或探针组。本发明提供的试剂可用于同时检测无乳链球菌和海豚链球菌,实现在一管反应中只进行1次PCR扩增即可对罗非鱼链球菌病的两种病原进行检测。
-
公开(公告)号:CN114657151B
公开(公告)日:2024-03-12
申请号:CN202210191045.6
申请日:2022-02-25
Applicant: 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
IPC: C12N7/01 , C12N7/00 , C07K16/08 , C12N15/38 , C12N15/54 , A61K39/245 , A61P31/22 , C12Q1/70 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种猪伪狂犬病病毒gE/gI/TK基因缺失疫苗株及其构建方法和应用,所述缺失株是在猪伪狂犬病毒PRV GD0304的基础上,通过基因工程方法缺失gE、gI和TK基因得到的;所述基因缺失株的保藏编号为CCTCC NO:V201955。相比于经典的Bartha K61毒株,针对变异毒株均有较好的攻毒保护效果,可以有效降低发病率和死亡率,血清中和效价也更高。本三基因缺失毒株在针对伪狂犬变异毒株的防控上有较高的应用和商业价值,是一株有希望应用于当前PRV流行防控工作的疫苗株。
-
公开(公告)号:CN115073608A
公开(公告)日:2022-09-20
申请号:CN202210281973.1
申请日:2022-03-22
Applicant: 广东海大集团股份有限公司 , 广东海大畜牧兽医研究院有限公司
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N15/85 , A61K39/187 , A61P31/14 , G01N33/68 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于生物疫苗制备技术领域,公开了一种猪瘟病毒E2的核酸‑蛋白复合标记性疫苗,具体公开了Fd片段作为鉴别标签在制备猪瘟病毒亚单位疫苗和/或核酸疫苗中的应用,所述Fd片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明首次将Fd片段作为鉴别标签在制备猪瘟病毒亚单位疫苗和/或核酸疫苗中的应用,该多肽片段不仅能帮助蛋白质正确折叠,增强重组蛋白的免疫活性的功能,而且在免疫后产生的Fd抗体可与弱毒疫苗株免疫或者野毒株感染所产生的抗体区分开,可用于集约化猪场经典猪瘟的预防和净化。
-
-
-
-
-
-
-
-
-