公开(公告)号：CN110106558A

公开(公告)日：2019-08-09

申请号：CN201910426662.8

申请日：2019-05-22

Applicant: 山西农业大学

Inventor： 贾栋 ,  王苑馨 ,  罗恒毅 ,  刘艳红 ,  胡军 ,  郭艳琼 ,  马瑞燕

IPC: C40B50/06 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q1/6806 ,  G16B30/10 ,  G16B30/20

Abstract: 本发明涉及一种莲草直胸跳甲热激蛋白基因的系统筛选及克隆鉴定方法，属于基因工程技术领域，包括取1~3龄幼虫，蛹为2~6日龄，成虫为1日内刚羽化，将以上处理样品收集在液氮中冻存；合成mRNA的全长cDNA并筛选全长cDNA片段，构建不同大小的cDNA文库；再次PCR扩增放大筛选的全长cDNA；对全长cDNA进行末端修复；然后再进行二次筛选，获得测序文库；文库构建完成后，对文库大小进行检测，文库质量检测结果达到要求后进行上机测序，再将得到的非冗余转录本序列与NR、Swissprot、GO、COG、KOG、Pfam、KEGG数据库比对，获得转录本的注释信息并筛选出所有热激蛋白基因，然后对每一条热激蛋白的EST序列群进行拼接组装，进而获得最完整的基因序列，最后根据完整序列设计引物、克隆测序。