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公开(公告)号：CN115927507B
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202210804458.7
申请日：2022-07-08
Applicant: 山东大学
IPC: C12P19/12 , C12P19/00 , C12P19/32 , C12P19/18 , C12N15/70 , C12N9/12 , C12N9/10 , C12N15/54 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种糖苷磷酸化酶联合单糖激酶及聚磷酸激酶制备寡糖的方法。包括步骤以供体单糖、受体糖、聚磷酸盐、低当量腺苷磷酸为底物，向底物中加入氯化镁，然后由聚磷酸酶、单糖激酶及糖苷磷酸化酶在25～40℃下联合催化反应1.5～22h，生成寡糖粗产物，经纯化后，得到寡糖。本发明提供了一种以单糖、受体底物、聚磷酸盐、低当量腺苷磷酸为底物，实现重要寡糖制备的方法，通过聚磷酸激酶以聚磷酸盐为底物实现ATP再生，有效解决了生物酶法合成寡糖过程中因需要添加大量昂贵糖核苷酸供体和辅助因子ATP，导致成本过高无法规模化生产的问题。应用本发明方法成功合成了乳酰‑N‑二糖、半乳酰‑N‑二糖、几丁二糖、蛋白N‑糖链核心三糖衍生物。
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公开(公告)号：CN114763552B
公开(公告)日：2024-04-30
申请号：CN202110038716.0
申请日：2021-01-12
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种微生物转谷氨酰胺酶的重组生产方法。该重组生产方法是将成熟MTG编码基因与前导肽Pro编码基因分别构建重组质粒，将重组质粒转化入同一宿主细胞内共表达，初步纯化后获得有活性的微生物转谷氨酰胺酶。本发明将MTG前导肽Pro与Trx蛋白融合后表达为“分子伴侣”Trx‑Pro，与成熟MTG蛋白共表达时辅助MTG正确折叠，并抑制其对重组表达宿主细胞的伤害，实现了微生物转谷氨酰胺酶的有效可溶性表达及一步法简便纯化，在经一步法简单纯化后得到初步纯化蛋白，再经反应试剂进一步处理，高效剥离“分子伴侣”Trx‑Pro，得到高纯度高活性的重组转谷氨酰胺酶，具有应用于药用蛋白修饰等方面的重要价值。
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公开(公告)号：CN106085933A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610403292.2
申请日：2016-06-06
Applicant: 山东大学
CPC classification number: C07K14/245 , C07K14/205 , C07K14/4713 , C12N9/1081
Abstract: 本发明公开了一株重组大肠杆菌，命名为重组大肠杆菌CEBO86，是将构建的重组质粒pACT3‑PglB和pBAD24‑malEM共转化已缺失waal基因的大肠杆菌CLM24中获得，该重组大肠杆菌的基因型为CLM24/p‑pglB+p‑malEM，有能同时表达PglB和malEM基因的功能。利用本发明所述重组大肠杆菌能够发酵制备具有人血型B抗原活性的N‑糖蛋白，且生产步骤简单，生产周期短，产量高，生产成本低，可实现N‑糖蛋白的大规模生产；制备获得的N‑糖蛋白具有良好的B抗原活性，可高效吸附人血浆中的抗B抗体，为通用血产品的制备提供新的选择方案，同时，可用于血型不兼容的器官移植，具有良好的工业开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN102250988A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110197504.3
申请日：2011-07-14
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种生物酶法生产塔格糖的方法，步骤是(1)构建L-阿拉伯糖同分异构酶(L-AI)工程菌大肠杆菌BL21(pET-15b/AI)；(2)利用构建的工程菌发酵获得含L-AI的细胞；(3)L-AI的分离纯化；(4)以L-AI催化D-半乳糖转化生产D-塔格糖；(5)选择可代谢D-半乳糖，而不代谢D-塔格糖的微生物代谢除去D-半乳糖，纯化获得D-塔格糖。本发明利用基因工程技术构建了高效表达L-AI的大肠杆菌工程菌，使L-AI得到了大量表达，拟补了该酶催化D-半乳糖转化生成D-塔格糖的效率较低的不足，同时利用可代谢D-半乳糖，而不代谢D-塔格糖的微生物除去酶催化反应后残留的底物半乳糖，得到了高纯度的D-塔格糖，具有重大的市场应用价值。
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公开(公告)号：CN114317483B
公开(公告)日：2024-02-13
申请号：CN202011058835.4
申请日：2020-09-30
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种催化生成L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸的单糖激酶及其编码基因与应用。本发明的单糖激酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明中的单糖激酶可以以L‑阿拉伯糖或L‑核糖为底物生成相应的单糖‑1‑磷酸，解决了生物酶法合成核苷酸糖过程中缺乏催化L‑阿拉伯糖生成L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸的单糖激酶的问题。本发明应用该单糖激酶开发了一种生物酶法高效制备L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸及一种一锅三酶法高效制备UDP‑L‑阿拉伯糖的方法，较化学合成方法步骤简单、经济高效，适用于L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸及UDP‑L‑阿拉伯糖的规模化制备，具有潜在的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114317483A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202011058835.4
申请日：2020-09-30
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种催化生成L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸的单糖激酶及其编码基因与应用。本发明的单糖激酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明中的单糖激酶可以以L‑阿拉伯糖或L‑核糖为底物生成相应的单糖‑1‑磷酸，解决了生物酶法合成核苷酸糖过程中缺乏催化L‑阿拉伯糖生成L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸的单糖激酶的问题。本发明应用该单糖激酶开发了一种生物酶法高效制备L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸及一种一锅三酶法高效制备UDP‑L‑阿拉伯糖的方法，较化学合成方法步骤简单、经济高效，适用于L‑阿拉伯糖‑1‑磷酸及UDP‑L‑阿拉伯糖的规模化制备，具有潜在的应用价值。
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公开(公告)号：CN102409070A
公开(公告)日：2012-04-11
申请号：CN201110273783.7
申请日：2011-09-15
Applicant: 山东大学
IPC: C12P19/30
Abstract: 本发明涉及一种稀少糖核苷酸的制备方法，特别涉及一种利用糖核苷酸合成酶制备稀少糖核苷酸及其衍生物的方法，属于糖核苷酸合成技术领域。本发明利用空肠弯曲菌C.je juniNCTC 11168来源的一种能够催化尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖(UDP-GlcNAc)生物合成的糖核苷酸合成酶，以酶的天然底物及其衍生物做催化反应底物，一步酶法合成系列糖核苷酸及稀少糖核苷酸。本发明采用底物识别广泛的糖核苷酸合成酶，能够催化多种糖核苷酸和稀少糖核苷酸的合成，催化反应效率较高，大大降低了糖核苷酸类产品的生产成本，能够适用于糖核苷酸和稀少糖核苷酸的大规模制备，具有潜在的应用前景。
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公开(公告)号：CN117683833A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311599726.7
申请日：2023-11-28
Applicant: 山东大学
IPC: C12P19/44 , C07H1/06 , C07H19/207 , C12P19/30
Abstract: 本发明涉及一种由核苷一磷酸制备核苷酸糖的方法。包括步骤：向底物糖、核苷一磷酸、聚磷酸盐和辅因子二价金属盐的混合反应溶液中加入核苷酸糖合成酶、无机焦磷酸酶和聚磷酸激酶，在35～40℃下联合催化反应2～50h，生成核苷酸糖粗产物，经纯化后，得到核苷酸糖。本发明提供的以核苷一磷酸为原料制备核苷酸糖的方法通过经济性较好、成本较低核苷一磷酸替代现有技术中使用的高成本核苷三磷酸，一步合成制备得到核苷酸糖。该方法极大地降低了制备核苷酸糖的成本，经济高效，并且步骤简单降低了核苷酸糖制备的难度，适合工业化生产，具有极高的经济价值。
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公开(公告)号：CN115927507A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210804458.7
申请日：2022-07-08
Applicant: 山东大学
IPC: C12P19/12 , C12P19/00 , C12P19/32 , C12P19/18 , C12N15/70 , C12N9/12 , C12N9/10 , C12N15/54 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种糖苷磷酸化酶联合单糖激酶及聚磷酸激酶制备寡糖的方法。包括步骤以供体单糖、受体糖、聚磷酸盐、低当量腺苷磷酸为底物，向底物中加入氯化镁，然后由聚磷酸酶、单糖激酶及糖苷磷酸化酶在25～40℃下联合催化反应1.5～22h，生成寡糖粗产物，经纯化后，得到寡糖。本发明提供了一种以单糖、受体底物、聚磷酸盐、低当量腺苷磷酸为底物，实现重要寡糖制备的方法，通过聚磷酸激酶以聚磷酸盐为底物实现ATP再生，有效解决了生物酶法合成寡糖过程中因需要添加大量昂贵糖核苷酸供体和辅助因子ATP，导致成本过高无法规模化生产的问题。应用本发明方法成功合成了乳酰‑N‑二糖、半乳酰‑N‑二糖、几丁二糖、蛋白N‑糖链核心三糖衍生物。
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公开(公告)号：CN118755780A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202411141519.1
申请日：2024-08-20
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明属于生物技术及绿色化学领域，具体涉及一种由果糖制备甘露糖及鸟苷二磷酸‑甘露糖的方法。甘露糖制备方法为：以果糖和聚磷酸盐为底物，加入腺嘌呤核苷酸为辅因子，加入单糖异构酶、N‑乙酰己糖胺激酶和聚磷酸激酶，一锅多酶催化生成甘露糖‑1‑磷酸，加入磷酸酶催化去磷酸化反应，得到D‑甘露糖。鸟苷二磷酸‑甘露糖制备方法为：以果糖、聚磷酸盐及鸟苷酸为底物，加入腺嘌呤核苷酸为辅因子，加入单糖异构酶、N‑乙酰己糖胺激酶、聚磷酸激酶、GDP‑Man焦磷酸化酶以及无机磷酸酶，一锅多酶催化生成鸟苷二磷酸‑甘露糖。本发明提供的方法将果糖以94％～99％的高转化率生成甘露糖‑1‑磷酸再去磷酸化制备甘露糖，及以果糖和鸟苷酸为底物生成鸟苷二磷酸‑甘露糖，具有底物转化率高、纯化简单的特点。
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