一种宽窗口单碱基编辑基因及其应用和育种方法

    公开(公告)号:CN110878305B

    公开(公告)日:2022-04-12

    申请号:CN201911249683.3

    申请日:2019-12-09

    Abstract: 本发明提供了一种单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA及其应用和育种方法。本发明通过大量的实验,尝试采用不同的方式对SpCas9‑ABE进行改造,终于成功获得了一个高单碱基编辑效率、宽窗口的CP1249‑OsSpCas9‑eABE编辑器。并且本发明还提供了包含该CP1249‑OsSpCas9‑eABE基因的表达盒和一种表达载体,以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的CP1249‑OsSpCas9‑eABE基因构建植物表达载体,进而构建水稻打靶载体,导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换,特别是实现由A/T碱基突变成C/G。利用该编辑器进行水稻基因编辑,可以编辑更多的突变体,获得更多的随机突变或者得到突变更多的突变体库。

    一种单轮筛选全阳性的肉眼可视水稻基因筛选方法及基因

    公开(公告)号:CN112746084A

    公开(公告)日:2021-05-04

    申请号:CN201911054343.5

    申请日:2019-10-31

    Abstract: 本发明提供了一种实现单轮筛选全阳性的肉眼可视水稻基因筛选方法,所述方法包括培养愈伤组织;合成序列表中SEQ ID No.1中所示序列的筛选标记基因,扩增后连接于载体中形成植物表达载体,转入根癌农杆菌;将愈伤组织与农杆菌接触10‑30分钟,其中,所述农杆菌中引入了所述植物表达载体,所述植物表达载体中携带所述筛选标记基因;进行愈伤组织培养;取带有颜色、状态良好的愈伤组织进行分化再生。并且本发明提供一种表达盒和一种表达载体,以及该表达盒和表达载体在遗传转化方面的应用。本发明利用Cb基因构建植物表达载体,导入水稻细胞后造成水稻转化阳性愈伤呈深绿色。

    一种高效的宽窗口单碱基编辑基因及其应用和育种方法

    公开(公告)号:CN110878305A

    公开(公告)日:2020-03-13

    申请号:CN201911249683.3

    申请日:2019-12-09

    Abstract: 本发明提供了一种高效的单碱基编辑系统OsSpCas9-eCDA及其应用和育种方法。本发明通过大量的实验,尝试采用不同的方式对SpCas9-ABE进行改造,终于成功获得了一个高单碱基编辑效率、宽窗口的CP1249-OsSpCas9-eABE编辑器。并且本发明还提供了包含该CP1249-OsSpCas9-eABE基因的表达盒和一种表达载体,以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的CP1249-OsSpCas9-eABE基因构建植物表达载体,进而构建水稻打靶载体,导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换,特别是实现由A/T碱基突变成C/G。利用该编辑器进行水稻基因编辑,可以编辑更多的突变体,获得更多的随机突变或者得到突变更多的突变体库。

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