提高引导编辑效率的融合蛋白表达框及相应骨架载体和应用

    公开(公告)号:CN116814677A

    公开(公告)日:2023-09-29

    申请号:CN202310793261.2

    申请日:2023-06-30

    Abstract: 本发明公开了一种提高引导编辑效率的融合蛋白表达框及相应骨架载体和应用。本发明的骨干载体包括PE融合蛋白、pegRNA;所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶和MLH基因破坏域序列组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中,融合蛋白和pegRNA表达框表达框位于同一双元载体中,Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子,融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成;pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成。本发明的ePE2‑OsMLHdn引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率,并能获得纯合突变植株,具有很好的应用前景。

    一种用于骨干载体的RNAi表达框及相应载体和应用

    公开(公告)号:CN116855532A

    公开(公告)日:2023-10-10

    申请号:CN202310811822.7

    申请日:2023-07-04

    Abstract: 本发明公开了一种用于骨干载体的RNAi表达框及相应载体和应用。本发明的表达框可以抑制MLH1基因表达并且实现了引导编辑后将其切除。本发明的骨干载体包括融合蛋白、pegRNA和OsMLH RNAi表达框和激活Cre重组酶表达的表达框;所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述的骨干质粒载体中,pegRNA表达框和融合蛋白表达框、OsMLH RNAi表达框及Cre表达框位于同一双元载体中。本发明的PE‑MLH1i‑Cre引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率,并能获得纯合突变植株,具有很好的应用前景。

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