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公开(公告)号：CN108546688B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201810316669.X
申请日：2018-04-08
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N9/02
Abstract: 一种提高硒蛋白TrxR表达的方法，属于蛋白原核表达技术领域。在TrxR的原核表达过程中，首先在37℃、220rpm条件下培养表达菌株至对数生长末期。然后向培养基中加入L‑半胱氨酸、亚硒酸钠、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)和Mn2+、Ca2+、Mg2+等二价金属离子，转入24℃、220rpm诱导表达24小时。Mn2+、Ca2+、Mg2+等二价金属离子的添加提高了TrxR的表达。本发明方法简便、原料易得、成本低廉，明显的提高了TrxR的表达，具有较高的利用价值。
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公开(公告)号：CN108611330A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810440050.X
申请日：2018-05-03
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N9/02
Abstract: 一种改善黄素蛋白纯化的方法属于蛋白纯化技术领域。包括：以含有黄素蛋白TrxR的大肠杆菌为原材料，加入TE buffer使菌体充分混匀，再加入溶菌酶37℃作用0.5-1h，充分破碎细胞得到混合液A，破碎其中核酸，对混合液A进行离心处理得到含有黄素蛋白TrxR的上清液B。将EDTA加入到上清液B中，再将上清液B加入ADP Sepharose亲和层析柱中，洗脱柱子收集洗脱液C，对洗脱液C离心浓缩得浓缩液D。对浓缩液D进行凝胶过滤，收集过滤组分得到纯黄素蛋白TrxR。本发明简化了黄素蛋白TrxR纯化方法，方法简单，成本低廉，纯化效果较好；EDTA能够保护ADP Sepharose亲和层析配基；具有较高的利用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108607237A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810439990.7
申请日：2018-05-03
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明属于亲和层析技术领域，提供一种高效简易的ADP配基层析介质的保护方法。向黄素蛋白TrxR粗酶液中加入螯合剂，螯合粗酶液中的Mg2+，抑制DNase活性，保护ADP配基。用TE缓冲液平衡2’5’ADP Sepharose亲和层析柱，将含有螯合剂的TrxR粗酶液加入柱子中使TrxR与ADP配基结合，采用TE缓冲液清洗非特异性结合在柱子上的杂蛋白，再采用TE+0.5M NaCl洗脱与ADP配基结合的TrxR，用再生缓冲液处理对柱子进行再生后，立即用TE缓冲液平衡再生后的柱子。本发明操作方法简单、螯合剂廉价易得，经济成本低；对ADP配基保护作用显著，实用性强。
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公开(公告)号：CN108546688A
公开(公告)日：2018-09-18
申请号：CN201810316669.X
申请日：2018-04-08
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N9/02
Abstract: 一种提高硒蛋白TrxR表达的方法，属于蛋白原核表达技术领域。在TrxR的原核表达过程中，首先在37℃、220rpm条件下培养表达菌株至对数生长末期。然后向培养基中加入L-半胱氨酸、亚硒酸钠、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)和Mn2+、Ca2+、Mg2+等二价金属离子，转入24℃、220rpm诱导表达24小时。Mn2+、Ca2+、Mg2+等二价金属离子的添加提高了TrxR的表达。本发明方法简便、原料易得、成本低廉，明显的提高了TrxR的表达，具有较高的利用价值。
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公开(公告)号：CN108611330B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN201810440050.X
申请日：2018-05-03
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N9/02
Abstract: 一种改善黄素蛋白纯化的方法属于蛋白纯化技术领域。包括：以含有黄素蛋白TrxR的大肠杆菌为原材料，加入TE buffer使菌体充分混匀，再加入溶菌酶37℃作用0.5‑1h，充分破碎细胞得到混合液A，破碎其中核酸，对混合液A进行离心处理得到含有黄素蛋白TrxR的上清液B。将EDTA加入到上清液B中，再将上清液B加入ADP Sepharose亲和层析柱中，洗脱柱子收集洗脱液C，对洗脱液C离心浓缩得浓缩液D。对浓缩液D进行凝胶过滤，收集过滤组分得到纯黄素蛋白TrxR。本发明简化了黄素蛋白TrxR纯化方法，方法简单，成本低廉，纯化效果较好；EDTA能够保护ADP Sepharose亲和层析配基；具有较高的利用价值。
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公开(公告)号：CN108607237B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201810439990.7
申请日：2018-05-03
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明属于亲和层析技术领域，提供一种ADP配基层析介质的保护方法。向硫氧还蛋白还原酶TrxR粗酶液中加入螯合剂，螯合粗酶液中的Mg2+，抑制DNase活性，保护ADP配基。用TE缓冲液平衡2’5’ADP Sepharose亲和层析柱，将含有螯合剂的TrxR粗酶液加入柱子中使TrxR与ADP配基结合，采用TE缓冲液清洗非特异性结合在柱子上的杂蛋白，再采用TE+0.5M NaCl洗脱与ADP配基结合的TrxR，用再生缓冲液处理对柱子进行再生后，立即用TE缓冲液平衡再生后的柱子。本发明操作方法简单、螯合剂廉价易得，经济成本低；对ADP配基保护作用显著，实用性强。
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公开(公告)号：CN108828048A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810338064.0
申请日：2018-04-12
Applicant: 大连理工大学
IPC: G01N27/447
Abstract: 一种快速制备蛋白变性或非变性电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法属于生物学分析领域，其组成成分及重量如下：基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，每份预制试粉含有3.02g的Tris碱、18.8g的甘氨酸、1g的SDS、0.68-0.72g的KH2PO4。蛋白非变性电泳缓冲液的预制试粉的组成成分及重量如下：基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，每份预制试粉含有3.02g的Tris碱、18.8g的甘氨酸、0.80-0.84g的KH2PO4。使用时，室温下，将每一份的试粉与1L去离子水充分混合互溶，即得到1L 1×浓度的电泳缓冲液。本发明的预制试粉使用方法简便快速，制备过程在5-10分钟内完成，提高蛋白电泳实验的整体效率；所制备的缓冲液，具有较长的电泳寿命和较好的蛋白稳定性。
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