公开(公告)号：CN114369600A

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN202210107537.2

申请日：2022-01-28

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  左二伟 ,  顾晰 ,  王大奇 ,  胡新德

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公开了一种用于修复Klhl18lowf突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统及应用，该系统包括特异性靶向Klhl18lowf的sgRNA、同源修复供体模板以及Cas9，并通过腺相关病毒载体递送，形成有效修复突变基因的编辑系统。本发明通过纯合Klhl18lowf小鼠模型实验，评价其对听力功能的影响，结果发现该系统能对患病小鼠进行精准的体内同源介导修复，成功纠正点突变，且小鼠注射该系统后长达24周内，可观察到听觉功能恢复、纤毛形态变规则、IHC持续囊泡释放功能恢复等，直观地验证了本发明系统对Klhl18lowf导致的感音神经性聋的治疗作用，能够用于制备治疗感音神经性聋的药物。

公开(公告)号：CN114369600B

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202210107537.2

申请日：2022-01-28

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  左二伟 ,  顾晰 ,  王大奇 ,  胡新德

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P27/16

Abstract: lowf本发明公开了一种用于修复Klhl18 突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统及应用，该系统包括特异性靶向Klhl18lowf的sgRNA、同源修复供体模板以及Cas9，并通过腺相关病毒载体递送，形成有效修复突变基因的编辑系统。本发明通过纯合Klhl18lowf小鼠模型实验，评价其对听力功能的影响，结果发现该系统能对患病小鼠进行精准的体内同源介导修复，成功纠正点突变，且小鼠注射该系统后长达24周内，可观察到听觉功能恢复、纤毛形态变规则、IHC持续囊泡释放功能恢复等，直观地验证了本发明系统对Klhl18lowf导致的感音神经性聋的治疗作用，能(56)对比文件Neil J Ingham等.Inner hair celldysfunction in Klhl18 mutant mice leadsto low frequency progressive hearingloss.Plos One.2021,第16卷摘要及图1、第2页第4段.李永顺.利用CRISPR/Cas9修复MITF突变导致的猪眼睛发育缺陷.中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）基础科学辑.2018,(第12期),第1-85页.Masafumi Inui等.Rapid generation ofmouse models with defined point mutationsby the CRISPR/Cas9 system.SCIENTIFICREPORTS.2014,第04卷第1-8页.Xi Gu等.Treatment of autosomalrecessive hearing loss via in vivoCRISPR/Cas9-mediated optimized homology-directed repair in mice.CellResearch.2022,第32卷第699-702页.Xuan Yao等.Homology-mediated endjoining-based targeted integration usingCRISPR/Cas9.Cell Research.2017,第27卷第801-814页.Xuan Yao等.CRISPR/Cas9-mediatedtargeted integration in vivo using ahomology-mediated end joining-basedstrategy.Journal of VisualizedExperiments.2018,第133卷第1-7页.Ruigao Song等.A pig model carryingheterozygous point mutaition of NCSTNsimulates familial acne inversa andreveals dysregulated cholesterolbiosynthesis via the Notch-pAMPK-HMGCRpathway.Science Bulletin.2021,第66卷第2343-2346页.Cia-Hin Lau等.CRISPR-based strategiesfor targeted transgene knock-in and genecorrection.Faculty Reviews.2020,第09卷第1-28页.Long Xie等.HMEJ-mediated efficientsite-specific gene integration in chickencells.Journal of BiologicalEngineering.2019,第13卷第1-10页.吴志胜等.精准高效外源DNA整合技术研究进展.生物技术通报.2020,(第03期),第29-37页.