公开(公告)号：CN114486829A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202210077385.6

申请日：2022-01-24

Applicant: 复旦大学

Inventor： 张祥民 ,  邰群飞 ,  于海龙

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/01 ,  G01N15/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明属于生命科学技术领域，具体为一种微量外泌体捕集并计数的方法。本发明方法采用注射泵、毛细管和荧光成像系统，包括毛细管内壁捕获外泌体的特异性配基的修饰、微量外泌体的捕集、外泌体的柱上荧光染色及显微镜观察计数。本发明使用毛细管开管柱，样品无需经过复杂的前处理及纯化过程，可大幅减少样品损失，简化实验步骤并缩短检测时间。该方法所需样品体积在1纳升‑100微升之间，单个显微镜视野的荧光成像可完成对1‑10^3个外泌体的精准计数；经过样品稀释或多次、多视野荧光叠加拍摄可扩展计数范围至10^6数量级。该方法还可以扩展应用到对不同来源和不同类型外泌体进行选择性捕集及计数定量。

公开(公告)号：CN118078968A

公开(公告)日：2024-05-28

申请号：CN202410127995.1

申请日：2024-01-30

Applicant: 复旦大学

Inventor： 高明霞 ,  李梦冉 ,  邰群飞 ,  张祥民

IPC: A61K38/44 ,  C12N9/04 ,  C12N5/09 ,  C01B33/12 ,  A61K9/51 ,  A61K47/46 ,  A61K47/02 ,  A61K47/04 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明涉及葡萄糖氧化酶修饰的仿生外泌体鞘状磁性介孔硅材料及其制备方法与应用。本发明在磁性纳米粒子表面实现介孔二氧化硅壳层的包覆，进一步在其表面修饰葡萄糖氧化酶，最后在基底表面包被外泌体膜，制备得到葡萄糖氧化酶修饰的仿生外泌体鞘状磁性介孔硅材料。该材料具有多重优势。外泌体膜具有高的生物相容性，有助于延长内部物质的循环时间，并提高对目标细胞的识别；磁性介孔二氧化硅颗粒不仅能够快速响应外部磁场的引导，有助于在特定部位实现纳米颗粒的聚集，并且具有较大的比表面积，有利于后续药物分子的负载，从而实现目标分子的递送；在中间层引入的葡萄糖氧化酶可加速细胞内的能量消耗过程，最终导致靶细胞饥饿至死亡。

公开(公告)号：CN114486829B

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202210077385.6

申请日：2022-01-24

Applicant: 复旦大学

Inventor： 张祥民 ,  邰群飞 ,  于海龙

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/01 ,  G01N15/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明属于生命科学技术领域，具体为一种微量外泌体捕集并计数的方法。本发明方法采用注射泵、毛细管和荧光成像系统，包括毛细管内壁捕获外泌体的特异性配基的修饰、微量外泌体的捕集、外泌体的柱上荧光染色及显微镜观察计数。本发明使用毛细管开管柱，样品无需经过复杂的前处理及纯化过程，可大幅减少样品损失，简化实验步骤并缩短检测时间。该方法所需样品体积在1纳升‑100微升之间，单个显微镜视野的荧光成像可完成对1‑10^3个外泌体的精准计数；经过样品稀释或多次、多视野荧光叠加拍摄可扩展计数范围至10^6数量级。该方法还可以扩展应用到对不同来源和不同类型外泌体进行选择性捕集及计数定量。

公开(公告)号：CN114486830A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202210082309.4

申请日：2022-01-24

Applicant: 复旦大学

Inventor： 张祥民 ,  于海龙 ,  邰群飞

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/01 ,  G01N15/10 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明属于生命科学技术领域，具体为用于单细胞中单分子蛋白质与生物分子计数的系统与方法。本发明系统包括微注射泵、三维可移动定位样品操作平台、荧光显微镜物镜系统、CCD图像采集系统、荧光图像处理和计数系统、抗体功能化修饰的玻片；在显微镜监视下使用样品操作平台控制吸取皮升体积单细胞，加样到功能化玻片上；在样品微液滴原位进行细胞裂解及目标分子释放，并被玻片上抗体捕集形成单分子层；标记荧光标签后，由荧光成像系统拍摄并完成荧光计数。本发明单次成像可实现对单细胞内1到3000个分子的蛋白质的精准计数，通过多次、多视野拍摄和数据叠加扩大计数范围至10^4。本发明可扩展对皮升级液滴内分子进行分子计数。