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公开(公告)号：CN114371297A
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN202111631965.7
申请日：2021-12-29
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明涉及一种固相富集结合串联酶切标签的富集新生蛋白质的方法，用AHA标记细胞后提取全蛋白；取细胞裂解液和炔基树脂通过click反应连接，用不同的缓冲液洗涤炔基树脂上非特异吸附的蛋白；用胰蛋白酶和TEV酶顺次酶切释放肽段，收集样品进行LC‑MS/MS分析；所述炔基树脂为将炔基肽段GGTENLYFQG(aPra)与醛基树脂通过还原烷基化反应连接得到的炔基树脂，所述炔基肽段中，ENLYFQG序列是TEV酶识别的序列，Q和G之间是酶切的位点，酶切后G(aPra)作为可裂解标签Tc‑tag共价键连接在AHA肽段上，用于质谱鉴定和肽段指认。本发明方法实现了新生蛋白质的高效富集，质量标签质谱兼容且帮助鉴定和指认新生蛋白质。此外，整个富集流程得到极大简化，降低了样本需要量。
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