公开(公告)号：CN118425532A

公开(公告)日：2024-08-02

申请号：CN202410630781.6

申请日：2024-05-21

Applicant: 复旦大学

Inventor： 陆豪杰 ,  包慧敏 ,  熊莹莹

IPC: G01N33/68 ,  C12P21/06 ,  G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/08 ,  G01N30/14 ,  G01N30/72 ,  C07K1/04

Abstract: 本发明涉及一种快速富集N‑乙酰葡萄糖胺修饰的肽段的方法，用GalNAz标记细胞后提取蛋白并酶解成肽段；肽段溶液与炔基树脂通过click反应连接，用不同的缓冲液洗涤炔基树脂上非特异吸附肽段；用胰蛋白酶切割释放肽段，收集样品进行LC‑MS/MS分析。炔基树脂是由含有一条作为linker的炔基肽段GGTENLYFQG(L‑aPra)与醛基树脂通过还原烷基化反应连接得到的，linker部分在胰蛋白酶酶切后产生裂解标签Tc‑tag共价键连接在糖肽的GlcNAc部分上，可用于质谱鉴定和肽段指认。本发明整个富集流程得到极大简化，且带上的标签质谱兼容，产生特定质量的氧鎓离子能帮助鉴定和指认O‑GlcNAc糖肽。此外，对于O‑GlcNAc这种低丰度修饰而言，该方法大大减少了富集过程中的样品损失，降低了需要的样品起始量。