公开(公告)号：CN108728476A

公开(公告)日：2018-11-02

申请号：CN201710245652.5

申请日：2017-04-14

Applicant: 复旦大学

Inventor： 刘贇 ,  徐值姣 ,  应天雷

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明属生物技术领域及基因工程技术领域，涉及抗体制备技术，具体涉及一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库从而筛选高亲和力抗体的方法。该方法利用CRISPR系统的剪切及后续NHEJ修复的途径，实现对抗体基因的可变区区域产生蛋白质序列的多样性，从而产生新抗体文库，为后续抗体筛选做准备。本发明方法比以往用易错pcr来形成抗体库及定向突变碱基替代等方法改进抗体库相比，产生的抗体库容大且多样化，打破抗体筛选时库容的限制，本方法通过调节CRISPR的表达，可循环产生新文库直至筛选出理想抗体，操作周期短，成本低，方便灵活。

公开(公告)号：CN111254165A

公开(公告)日：2020-06-09

申请号：CN201811460862.7

申请日：2018-12-01

Applicant: 复旦大学

Inventor： 刘贇 ,  徐值姣 ,  应天雷

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/81 ,  C12N15/13 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明属于生物技术领域和基因工程技术领域,提供一种简便灵活的方法对整合的外源蛋白基因序列定向编辑产生多样性文库，用于目标蛋白的后续筛选。本发明的方法包括以下步骤：构建CRISPR系统质粒和含目的蛋白基因表达元件的质粒；目的蛋白基因表达元件整合细胞基因组，得到表达目的蛋白基因的细胞株；转化CRISPR系统质粒，诱变产生蛋白序列多样性筛选文库；定向筛选目标蛋白。使用该方法可以自发产生多样化突变，可循环地形成文库，用于筛选，具有操作灵活简单、周期短、成本低的特点。