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公开(公告)号：CN119061066A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411274104.1
申请日：2024-09-12
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明中公开了一种基于副流感病毒5型L株PIV5‑L的Cas9表达载体，所述Cas9表达载体为重组质粒pB‑L‑Cas9(HN‑L)，序列如SEQ ID NO.73所示。本发明同时公开了一种基于副流感病毒5型L株PIV5‑L的L‑CRISPR/Cas9系统，包含靶向目标基因的sgRNA和上述的Cas9表达载体。本发明还公开了上述L‑CRISPR/Cas9系统在构建基因敲除细胞中的应用。本发明构建的基于PIV5‑L的Cas9表达载体可以实现Cas9蛋白的有效表达；构建的L‑sgRNA‑Cas9、L‑GFP‑sgRNA‑Cas9一体化系统可以实现对sgRNA和Cas9基因组成的整个CRISPR系统的高效递送和表达，从而实现对靶细胞目标基因的敲除或敲低效果。
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公开(公告)号：CN116769826A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202210235262.0
申请日：2022-03-10
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属基因工程技术领域，涉及嗜B细胞表达递送系统及其构建方法和应用，具体涉及一种源自人B细胞的新型副流感病毒株PIV5‑L进行成功持续表达外源基因的嗜B细胞递送的假病毒样表达系统的构建方法。与传统慢病毒表达系统相比，本方法具有安全、高效和广谱的优点，且适用于多数唾液酸SA高表达的不同类型的肿瘤原代细胞株。本发明还包括用上述系统构建假病毒样颗粒对任意易感细胞进行外源基因递送表达的应用。
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公开(公告)号：CN116769734A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202210234488.9
申请日：2022-03-10
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/62 , C12N15/28 , C12N15/16 , A61K35/768 , A61K48/00 , A61K38/19 , A61K38/22 , A61P35/00 , C12R1/93
Abstract: 本发明属基因工程技术领域，涉及缺氧微环境响应溶瘤病毒株的构建方法及其应用，具体涉及一种基于副流感病毒PIV5‑L溶瘤病毒株的构建方法，本发明中对一种源自人B细胞的新型副流感病毒株PIV5‑L进行携带表达外源基因TNF‑α和Leptin及其靶向肿瘤缺氧微环境的溶瘤特性的基因改造，包括：PIV5‑L病毒株的分离和鉴定，携带外源基因和响应缺氧微环境溶瘤特性的基因改造及其单独或联合使用的抗肿瘤疗效。本发明还包括上述改造溶瘤病毒株用于对不同类型肿瘤的治疗应用。
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公开(公告)号：CN119120572A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411274133.8
申请日：2024-09-12
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113
Abstract: 本发明中公开了重组质粒L‑GFPshCtrl，序列如SEQ ID NO.9所示和重组质粒L‑GFP‑shCtrl，序列如SEQ ID NO.10所示；基于这两种重组质粒分别构建了两种不同的L‑RNAi系统以递送shRNA：一种是将amiRNA连接在无关mRNA的3’端共同作为一个转录本，即L‑GFPshRNA系统；一种是利用PIV5‑L自身的转录终止和起始信号将shRNA作为单独的转录本，即L‑GFP‑shRNA系统。基于本发明构建的这两种不同的L‑RNAi递送系统，本发明以UBR5为靶点，通过无缝克隆技术将shUBR5取代重组质粒L‑GFPshCtrl或L‑GFP‑shCtrl中的shCtrl，构建得到重组质粒L‑GFPshUBR5或L‑GFP‑shUBR5；L‑GFPshUBR5或L‑GFP‑shUBR5系统在乳腺癌细胞株MDAMB231及B淋巴瘤细胞株DG75中均可有效下调UBR5的蛋白表达。
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