公开(公告)号：CN117947215A

公开(公告)日：2024-04-30

申请号：CN202410090465.4

申请日：2024-01-23

Applicant: 吉林大学

Inventor： 梁重阳 ,  曲凌萱

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6816 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于检测HIV‑1病毒的CRISPR‑Cas13a系统及检测方法，非扩增检测HIV‑1，包括基因编辑检测试剂和荧光半定量检测系统，所述基因编辑检测试剂包括Cas13a蛋白、crRNA、报告探针、检测缓冲液、RNA酶抑制剂和DEPC水，crRNA的序列选择如SEQ ID NO:5～8所示的核苷酸序列中的一种或多种；荧光半定量检测系统包括荧光酶标检测器和荧光酶标板，本发明基于CRISPR/Cas13a系统的精确识别，通过检测报告分子发出的荧光信号以非扩增的方式在缩短的反应时间、正常的反应温度内实现现场原位检测，操作简单，检测流程迅速、灵敏度高，满足不发达地区核酸检测的需要。

公开(公告)号：CN120060208A

公开(公告)日：2025-05-30

申请号：CN202510258117.8

申请日：2025-03-05

Applicant: 吉林大学

Inventor： 梁重阳 ,  刘志屹 ,  鲍倩 ,  曲凌萱 ,  方帅 ,  李泓睿

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6816 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种CRISPR Cas13a突变体Cas13a‑Y967A及其基因、重组蛋白表达系统和应用，属于蛋白质工程改造技术领域。本发明对Leptotricia buccalis来源的野生型CRISPR Cas13a基因和氨基酸序列进行分析后，确定了多个关键位点，分别对关键位点进行定点突变，改造CRISPR Cas13a的分子结构，经筛选最终获得了相较于Cas13a‑WT RNA切割活性显著提高的CRISPR Cas13a突变体Cas13a‑Y967A。本发明的CRISPR Cas13a突变体Cas13a‑Y967A在病原体检测和疾病治疗等方面具有广泛的应用价值。

公开(公告)号：CN118127231A

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202410090280.3

申请日：2024-01-23

Applicant: 吉林大学

Inventor： 梁重阳 ,  曲凌萱

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6816 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13a系统的HIV‑1病毒pol基因非扩增检测方法，提取待测样品RNA；配制CRISPR‑Cas13a检测体系；CRISPR‑Cas13a检测体系中的引导RNA序列如SEQ ID NO.1所示、如SEQ ID NO.2所示、如SEQ ID NO.3所示或如SEQ ID NO.4所示中的任意一条或多条；在检测分析体系中加入待测样品RNA；加入一对检测报告分子和RNA酶抑制剂，实时检测相应荧光值并进行判断，通过检测报告分子被Cas13a蛋白切割产生的荧光强度的稳定变化，能够以非扩增方式短时间、常温条件对HIV‑1病毒进行现场原位快速检测，灵敏度高。