中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法

    公开(公告)号:CN110655565B

    公开(公告)日:2021-08-17

    申请号:CN201911059553.3

    申请日:2019-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 周克夫 孟坤 龙敏

    Abstract: 中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法,涉及融合蛋白表达纯化方法技术领域,提供一种基于中华乌塘鳢卵黄蛋白原基因,克隆其部分基因并体外重组质粒,转入大肠杆菌进行原核表达,IPTG诱导温度为16℃条件下获得高效融合表达,并且表达目的蛋白以可溶性状态存在,目的蛋白占细菌可溶性蛋白总量25%以上。应用纯化技术获得融合蛋白MNP‑VTG,通过蔗糖酶酶切将标签MNP从融合蛋白中分离获得目的蛋白VTG单体。该方法表达高效纯化VTG简便,因是可溶性,分离比包涵体简单,无需复性。获得的重组VTG为后续应用提供了稳定均一的原料基础。给重组蛋白可以用于生物活性功能研究,亦可以制备相应抗体开展检测研究。

    中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法

    公开(公告)号:CN110655565A

    公开(公告)日:2020-01-07

    申请号:CN201911059553.3

    申请日:2019-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 周克夫 孟坤 龙敏

    Abstract: 中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法,涉及融合蛋白表达纯化方法技术领域,提供一种基于中华乌塘鳢卵黄蛋白原基因,克隆其部分基因并体外重组质粒,转入大肠杆菌进行原核表达,IPTG诱导温度为16℃条件下获得高效融合表达,并且表达目的蛋白以可溶性状态存在,目的蛋白占细菌可溶性蛋白总量25%以上。应用纯化技术获得融合蛋白MNP-VTG,通过蔗糖酶酶切将标签MNP从融合蛋白中分离获得目的蛋白VTG单体。该方法表达高效纯化VTG简便,因是可溶性,分离比包涵体简单,无需复性。获得的重组VTG为后续应用提供了稳定均一的原料基础。给重组蛋白可以用于生物活性功能研究,亦可以制备相应抗体开展检测研究。

    基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用

    公开(公告)号:CN110726847B

    公开(公告)日:2020-12-08

    申请号:CN201911060062.0

    申请日:2019-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用,涉及环境污染检测和免疫学领域,公开了一种基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原(Vitellongenin,VTG),利用重组蛋白作为抗原制备多克隆抗体。建立检测VTG快速准确的免疫检测方法。利用该方法检测被17‑β雌二醇(E2)诱导的雄性青鳉鱼,发现被E2诱导的雄鱼VTG水平比未诱导雄鱼VTG水平明显升高,利用该方法鉴定雌雄鱼发现雌鱼体内VTG明显高于雄鱼。差异极显著,该技术可以用于环境雌激素污染的监测和雌雄鱼的鉴别。

    中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因及克隆方法与应用

    公开(公告)号:CN110628777A

    公开(公告)日:2019-12-31

    申请号:CN201911060054.6

    申请日:2019-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 周克夫 孟坤

    Abstract: 本发明涉及分子生物学和环境科学领域,公开了一种中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因及其克隆方法与应用,具有VTG基因序列如SEQ1所示和氨基酸序列如SEQ2。本发明首次获得对环境变化敏感的中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因,填补了中华乌塘鳢基因组的空白,同时由于该基因是在E2刺激下诱导雄鱼获得的VTG基因,因此,该基因的表达与环境激素的刺激直接相关,该基因的调控和蛋白更能够反应环境激素的污染现状。因此,该基因及蛋白作为环境雌激素的生物标记物对环境监测和评价更准确和实用。同时对更深入研究VTG蛋白在环境激素作用下的表达作用和应用具有理论和实践意义。

    拟中肋骨条藻的快速检测方法及试纸条的制备与使用方法

    公开(公告)号:CN109085356A

    公开(公告)日:2018-12-25

    申请号:CN201810893079.3

    申请日:2018-08-07

    CPC classification number: G01N33/577 G01N33/558

    Abstract: 拟中肋骨条藻的快速检测方法及试纸条的制备与使用方法,涉及基于胶体金免疫层析分析技术的浮游藻类免疫层析检测。提供拟中肋骨条藻的免疫层析检测分析试纸条、拟中肋骨条藻的免疫层析检测分析试纸条的制备方法、拟中肋骨条藻的免疫层析检测分析试纸条的使用方法和拟中肋骨条藻的免疫层析检测方法。通过免疫学技术,以藻细胞免疫实验动物,制备浮游藻的单克隆抗体,利用抗体,建立GICA的免疫分析方法。又通过比色板,对GICA的显色结果进行较别,估算出赤潮藻在水体当中的浓度。直接将含藻的水样滴加到试纸条上即可获得结果阳性,并且可以根据反应的的强弱给出藻细胞浓度的大致数值结果。

    重组胸腺素alpha原在功能饲料中的应用

    公开(公告)号:CN108157676A

    公开(公告)日:2018-06-15

    申请号:CN201711387545.2

    申请日:2017-12-20

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 重组胸腺素alpha原在功能饲料中的应用,涉及功能饲料。所提供的ProTα新用途是ProTα在制备功能饲料达到改善养殖水水质条件的应用。所述重组胸腺素alpha原可在功能饲料中应用。所述胸腺素α原在功能饲料中的作用是通过降低水体亚硝酸盐、氨氮水平,提高水体溶解氧浓度机体,从而达到增强机体抗病力,提高存活率的效果。所述功能饲料包括水产养殖饲料等。所述重组胸腺素alpha原可在改善水产养殖水体水质中应用。所述胸腺素α原包括重组胸腺素α原和由组织分离纯化的胸腺素α原。

    重组胸腺素alpha原在功能饲料中的应用

    公开(公告)号:CN108157676B

    公开(公告)日:2021-08-31

    申请号:CN201711387545.2

    申请日:2017-12-20

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 重组胸腺素alpha原在功能饲料中的应用,涉及功能饲料。所提供的ProTα新用途是ProTα在制备功能饲料达到改善养殖水水质条件的应用。所述重组胸腺素alpha原可在功能饲料中应用。所述胸腺素α原在功能饲料中的作用是通过降低水体亚硝酸盐、氨氮水平,提高水体溶解氧浓度机体,从而达到增强机体抗病力,提高存活率的效果。所述功能饲料包括水产养殖饲料等。所述重组胸腺素alpha原可在改善水产养殖水体水质中应用。所述胸腺素α原包括重组胸腺素α原和由组织分离纯化的胸腺素α原。

    中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因及克隆方法与应用

    公开(公告)号:CN110628777B

    公开(公告)日:2021-06-18

    申请号:CN201911060054.6

    申请日:2019-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 周克夫 孟坤

    Abstract: 本发明涉及分子生物学和环境科学领域,公开了一种中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因及其克隆方法与应用,具有VTG基因序列如SEQ1所示和氨基酸序列如SEQ2。本发明首次获得对环境变化敏感的中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因,填补了中华乌塘鳢基因组的空白,同时由于该基因是在E2刺激下诱导雄鱼获得的VTG基因,因此,该基因的表达与环境激素的刺激直接相关,该基因的调控和蛋白更能够反应环境激素的污染现状。因此,该基因及蛋白作为环境雌激素的生物标记物对环境监测和评价更准确和实用。同时对更深入研究VTG蛋白在环境激素作用下的表达作用和应用具有理论和实践意义。

    基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用

    公开(公告)号:CN110726847A

    公开(公告)日:2020-01-24

    申请号:CN201911060062.0

    申请日:2019-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原在水体雌激素污染检测方法及应用,涉及环境污染检测和免疫学领域,公开了一种基于重组中华乌塘鳢卵黄蛋白原(Vitellongenin,VTG),利用重组蛋白作为抗原制备多克隆抗体。建立检测VTG快速准确的免疫检测方法。利用该方法检测被17-β雌二醇(E2)诱导的雄性青鳉鱼,发现被E2诱导的雄鱼VTG水平比未诱导雄鱼VTG水平明显升高,利用该方法鉴定雌雄鱼发现雌鱼体内VTG明显高于雄鱼。差异极显著,该技术可以用于环境雌激素污染的监测和雌雄鱼的鉴别。

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