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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108728468A
公开(公告)日：2018-11-02
申请号：CN201710264591.7
申请日：2017-04-21
Applicant: 南通大学
Inventor： 苗靳
Abstract: 本发明提供了克隆目标DNA片段的方法及载体，所述方法包括：识别位于目标DNA片段的一侧的CRISPR-Cas9识别位点以及分别位于所述目标DNA片段两侧的整合位点和第一重组位点，所述第一重组位点位于所述目标DNA片段与所述CRISPR-Cas9识别位点的之间；将整合位点、识别位点以及第一重组位点克隆到载体中，将spacer序列整合到所述载体上sgRNA序列的5’端；通过同源重组将将所述载体整合到所述目标DNA片段所在的遗传物质上；诱导所述阳性克隆的Cas9编码序列的表达，切割产生的片段两端的两个第一重组位点之间发生同源重组；筛选携带所述目标DNA片段的质粒。本发明的方法步骤简单，成本低，效率高，特别适用从生物体中克隆大的目标DNA片段。
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公开(公告)号：CN118048376A
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202410265112.3
申请日：2024-03-08
Applicant: 南通大学
Abstract: 本申请公开一种低温下农药诱导基因表达的方法，农药为双炔酰菌胺，诱导mcherry在大肠杆菌或根癌农杆菌中23℃下表达，将质粒1和质粒2转化大肠杆菌Top10菌株，取阳性克隆37℃摇菌，待OD600到达0.50‑0.55，加入终浓度50µM的双炔酰菌胺，转移到23℃下继续摇菌检测目标基因表达效果；将质粒3转化根癌农杆菌LBA4404菌株，取阳性克隆在28℃摇菌，待OD600到达0.50‑0.55，加入终浓度50µM的双炔酰菌胺，23℃下继续摇菌检测目标基因表达效果；通过改变T7 RNA聚合酶的分割位点，对Mandi‑T7系统进行了改造，在大肠杆菌或根癌农杆菌中实现室温范围的诱导表达。
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公开(公告)号：CN108728468B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN201710264591.7
申请日：2017-04-21
Applicant: 南通大学
Inventor： 苗靳
Abstract: 本发明提供了克隆目标DNA片段的方法及载体，所述方法包括：识别位于目标DNA片段的一侧的CRISPR‑Cas9识别位点以及分别位于所述目标DNA片段两侧的整合位点和第一重组位点，所述第一重组位点位于所述目标DNA片段与所述CRISPR‑Cas9识别位点的之间；将整合位点、识别位点以及第一重组位点克隆到载体中，将spacer序列整合到所述载体上sgRNA序列的5’端；通过同源重组将将所述载体整合到所述目标DNA片段所在的遗传物质上；诱导所述阳性克隆的Cas9编码序列的表达，切割产生的片段两端的两个第一重组位点之间发生同源重组；筛选携带所述目标DNA片段的质粒。本发明的方法步骤简单，成本低，效率高，特别适用从生物体中克隆大的目标DNA片段。
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公开(公告)号：CN113234746A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110440791.X
申请日：2021-04-23
Applicant: 南通大学
Abstract: 本申请公开了一种农药诱导蛋白互作和诱导基因表达的方法，所述农药为双炔酰菌胺，诱导蛋白互作为诱导绿色荧光蛋白三片段互补，诱导基因表达为诱导绿色荧光蛋白编码基因表达；提供的ABI‑CP是使用双炔酰菌胺控制蛋白互作的一种拓扑结构变异体，突破已有方法对于融合蛋白空间相对位置的限制；利用双炔酰菌胺调控基因表达的方法，由于农药化合物自身的特性，突破了现有诱导基因表达的化合物的局限性。这些局限包括成本高，环境中不可大量使用，非生理中性（可被快速代谢），不易进入细胞起效等。
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