公开(公告)号：CN111593037B

公开(公告)日：2021-02-09

申请号：CN202010542620.3

申请日：2020-06-15

Applicant: 南通大学

Inventor： 王勇军 ,  王莹洁 ,  梁浩

IPC: C12N9/74 ,  A61K38/48 ,  A61P7/04 ,  A61P9/00 ,  A61P17/02

Abstract: 本发明公开了一种爬行动物来源的凝血酶，采用基因克隆方法获取多疣壁虎凝血酶原2(Prethrombin‑2)的序列；构建Prethrombin‑2真核表达重组质粒，转染293T细胞，诱导表达Prethrombin‑2重组蛋白并纯化；利用锯鳞蝰蛇毒(Ecarin)激活Prethrombin‑2重组蛋白，得到具有凝血酶活性的壁虎凝血酶(Gecko Thrombin,gTM)。本发明所述的凝血酶在弱碱性(pH8.0)和37℃的条件下，活性最高，Kcat/Km为13475.41M‑1S‑1；在pH中性条件下，壁虎凝血酶活性显著高于人的凝血酶活性，提示壁虎凝血酶有望成为一种高效的止血剂，特别是为中枢神经快速止血提供潜在的靶向药物。

公开(公告)号：CN111593037A

公开(公告)日：2020-08-28

申请号：CN202010542620.3

申请日：2020-06-15

Applicant: 南通大学

Inventor： 王勇军 ,  王莹洁 ,  梁浩

IPC: C12N9/74 ,  A61K38/48 ,  A61P7/04 ,  A61P9/00 ,  A61P17/02

Abstract: 本发明公开了一种爬行动物来源的凝血酶，采用基因克隆方法获取多疣壁虎凝血酶原2(Prethrombin-2)的序列；构建Prethrombin-2真核表达重组质粒，转染293T细胞，诱导表达Prethrombin-2重组蛋白并纯化；利用锯鳞蝰蛇毒(Ecarin)激活Prethrombin-2重组蛋白，得到具有凝血酶活性的壁虎凝血酶(Gecko Thrombin,gTM)。本发明所述的凝血酶在弱碱性(pH8.0)和37℃的条件下，活性最高，Kcat/Km为13475.41M-1S-1；在pH中性条件下，壁虎凝血酶活性显著高于人的凝血酶活性，提示壁虎凝血酶有望成为一种高效的止血剂，特别是为中枢神经快速止血提供潜在的靶向药物。