公开(公告)号：CN119039406A

公开(公告)日：2024-11-29

申请号：CN202411186696.1

申请日：2024-08-28

Applicant: 南昌大学第一附属医院

Inventor： 黎萍 ,  高鹏翔 ,  向天新 ,  陆明 ,  刘洋 ,  廖文建 ,  祝兰兰 ,  张伟

IPC: C07K14/26 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C07K1/22 ,  C07K1/14 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种肺炎克雷伯菌铁载体蛋白fecA3的纯化方法，包括如下步骤，（1）fecA3重组载体转化；（2）fecA3蛋白诱导表达与检测；（3）取诱导后菌液1mL，离心收集菌体，与未诱导对照一同进行SDS‑PAGE分析，检测fecA3蛋白的表达；（4）Ni柱亲和层析纯化；（5）蛋白复性与浓缩；（6）纯化与复性后fecA3蛋白的鉴定；（7）质谱鉴定：利用LC‑MS/MS质谱技术对纯化的fecA3蛋白进行了鉴定。本发明解决了纯度差及产量低的问题，本发明通过截断一段肺炎克雷伯菌种属fecA3蛋白特有的信号肽的方案，大大降低fecA3蛋白的疏水性，成功的对肺炎克雷伯菌的fecA3蛋白进行纯化，并且质谱鉴定成功表达，且纯度达到99.7%，且分子量与预期相符。