公开(公告)号：CN111663187A

公开(公告)日：2020-09-15

申请号：CN202010648075.6

申请日：2020-07-07

Applicant: 南昌大学第一附属医院

Inventor： 罗东 ,  陈开森 ,  陈嫱 ,  詹佳欢

IPC: C40B50/06 ,  C40B40/06 ,  C12N15/74 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种金黄色葡萄球菌转座子测序文库及构建方法，所述构建方法包括：（一）质粒构建：先构建质粒骨架和转座子，再合成完整pSATn21质粒；（二）质粒转化：将pSATn21质粒转入DC10B修饰后再转入金葡菌Newman标准菌株；（三）诱导转座：将上一步所得菌株经培养基培养、转座和洗脱，获得文库；（四）文库验证：在mmeⅠ酶切位点切割该位点下游一定数量的核苷酸序列，得到一段带有转座子片段及一定数量来自于金葡菌Newman基因组的融合片段，通过加接头PCR富集的方式，进行高通量测序。本发明构建方法随机性更高，转座子随机插入至金黄色葡萄球菌基因组的TA位点中，且无偏嗜性；构建的文库为后期高通量筛选细菌耐药、不同条件下的生存能力等奠定基础。