公开(公告)号：CN114085804B

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202111322147.9

申请日：2021-11-09

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  郑雯 ,  钟亚丹 ,  杨斌

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/0735 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种由人胚胎干细胞体外诱导分化形成的皮肤类器官及其高效培养方法与用途，过程包括：分化前处理；采用第一分化培养基诱导人胚胎干细胞分化形成表皮外胚层和脑神经嵴外胚层细胞；先后采用第二分化培养基、E6培养基诱导步骤一获得的脑神经嵴外胚层细胞分化成真皮成纤维细胞；先后采用第三分化培养基、第四分化培养基先后诱导步骤二获得的培养物的感觉神经末梢及毛囊的发育和成熟。本发明的优点有：提高了从人胚胎干细胞三维分化成皮肤类器官的效率，皮肤类器官获得率为55.30％±11.06％，节约培养成本；获得的皮肤类器官具有分层的表皮、真皮、毛囊、黑素细胞和感觉神经末梢等，可用于感染性、遗传性皮肤病和皮肤肿瘤等疾病研究，为脱发患者植发提供毛发来源。

公开(公告)号：CN116064542A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211324850.8

申请日：2022-10-27

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  郑雯 ,  钟亚丹 ,  杨斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种AAVS1:Brainbow敲入的人胚胎干细胞系及其构建方法与应用，步骤包括：构建sgRNA表达质粒、打靶Donor载体，将sgRNA质粒、Cas9质粒和打靶Doner载体共同电转H9人胚胎干细胞系，镜下观察并挑选并验证，得到AAVS1:Brainbow敲入的人胚胎干细胞系。本发明优点包括：结合CreERT2/Loxp技术可以在该细胞系上对特定的细胞群进行标记，并在人胚胎干细胞3D培养分化过程中实现对单细胞的谱系追踪，用于在类器官水平研究胚胎干细胞到成体细胞分化和发育过程。

公开(公告)号：CN112746074B

公开(公告)日：2022-12-02

申请号：CN202011493656.3

申请日：2020-12-16

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  钟亚丹 ,  荣知立 ,  杨斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N15/90 ,  C12N5/071

Abstract: 本发明公开了Keratin 5‑IRES‑eGFP敲入的hESCs细胞系的构建及诱导分化方法。具体方法为：构建sgRNA质粒，根据sgRNA切割位点构建打靶Doner载体，将cas9质粒，sgRNA质粒，打靶Doner载体共电转至hESCs细胞，得到初步阳性单克隆细胞系后电转表达cre酶的质粒，通过PCR跑胶和测序得到最终Keratin 5‑IRES‑eGFP敲入的hESCs细胞系。诱导分化hESCs细胞为角质形成细胞从而得到Keratin 5阳性的基底层角质形成细胞。该细胞系的建立有利于筛选出Keratin 5阳性的基底层角质形成细胞，从而为临床上表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病研究提供细胞模型。

公开(公告)号：CN114085804A

公开(公告)日：2022-02-25

申请号：CN202111322147.9

申请日：2021-11-09

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  郑雯 ,  钟亚丹 ,  杨斌

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/0735 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种由人胚胎干细胞体外诱导分化形成的皮肤类器官及其高效培养方法与用途，过程包括：分化前处理；采用第一分化培养基诱导人胚胎干细胞分化形成表皮外胚层和脑神经嵴外胚层细胞；先后采用第二分化培养基、E6培养基诱导步骤一获得的脑神经嵴外胚层细胞分化成真皮成纤维细胞；先后采用第三分化培养基、第四分化培养基先后诱导步骤二获得的培养物的感觉神经末梢及毛囊的发育和成熟。本发明的优点有：提高了从人胚胎干细胞三维分化成皮肤类器官的效率，皮肤类器官获得率为55.30％±11.06％，节约培养成本；获得的皮肤类器官具有分层的表皮、真皮、毛囊、黑素细胞和感觉神经末梢等，可用于感染性、遗传性皮肤病和皮肤肿瘤等疾病研究，为脱发患者植发提供毛发来源。

公开(公告)号：CN112746074A

公开(公告)日：2021-05-04

申请号：CN202011493656.3

申请日：2020-12-16

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  钟亚丹 ,  荣知立 ,  杨斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N15/90 ,  C12N5/071

Abstract: 本发明公开了Keratin 5‑IRES‑eGFP敲入的hESCs细胞系的构建及诱导分化方法。具体方法为：构建sgRNA质粒，根据sgRNA切割位点构建打靶Doner载体，将cas9质粒，sgRNA质粒，打靶Doner载体共电转至hESCs细胞，得到初步阳性单克隆细胞系后电转表达cre酶的质粒，通过PCR跑胶和测序得到最终Keratin 5‑IRES‑eGFP敲入的hESCs细胞系。诱导分化hESCs细胞为角质形成细胞从而得到Keratin 5阳性的基底层角质形成细胞。该细胞系的建立有利于筛选出Keratin 5阳性的基底层角质形成细胞，从而为临床上表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病研究提供细胞模型。