公开(公告)号：CN118813616A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202410648426.1

申请日：2024-05-23

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  郑雯 ,  丘碧莹 ,  杨斌

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/869 ,  C12N5/10 ,  A61K48/00 ,  A61P17/00

Abstract: 本发明公开了一种靶向SERPINB7c.796C>T点突变的sgRNA、复制缺陷型I型单纯疱疹病毒载体递送系统及制备方法与应用，靶向SERPINB7c.796C>T点突变的sgRNA序列如SEQ ID NO.1所示，复制缺陷型I型单纯疱疹病毒载体递送系统制备步骤包括：携带靶向SERPINB7c.796C>T点突变基因治疗元件的I型单纯疱疹病毒载体构建、复制缺陷型I型单纯疱疹病毒载体体外包装。本发明的优点包括：靶向SERPINB7c.796C>T点突变的MUTsgRNA特异性识别和切割点突变基因组而不切割野生型基因组，且该sgRNA无脱靶风险；同源重组方法基因编辑的碱基纠正效率为84.99％，且点突变细胞经同源重组途径基因编辑后在功能上有所恢复。经过优化，在体外包装获得靶向SERPINB7c.796C>T点突变的复制缺陷型I型单纯疱疹病毒，为长岛型掌跖角化症患者提供治疗新策略。

公开(公告)号：CN118581094A

公开(公告)日：2024-09-03

申请号：CN202410861241.9

申请日：2024-06-28

Applicant: 南方医科大学皮肤病医院(广东省皮肤病医院、广东省皮肤性病防治中心、中国麻风防治研究中心)

Inventor： 刘军 ,  郑雯 ,  杨斌 ,  罗盈盈 ,  丘碧莹

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02 ,  C12N5/071 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种携带SERPINB7c.796C>T点突变的人皮肤类器官长岛型掌跖角化症疾病模型构建方法及应用，步骤包括：构建sgRNA表达质粒和打靶Donor载体，将sgRNA质粒、Cas9质粒和打靶Doner载体共同电转人胚胎干细胞系，并通过电转Cre酶质粒，得到SERPINB7c.796C>T敲入的人胚胎干细胞系。利用此细胞系进行3D分化培养，构建NPPK皮肤类器官模型，开发新的、有效的疾病模型。本发明优点包括：结合CRISPR/Cas9技术在人胚胎干细胞细胞系上构入NPPK频发致病突变SERPINB7c.796C>T，并进行3D分化培养NPPK皮肤类器官疾病模型，在类器官水平进行深入性研究，阐明NPPK的致病机制，该模型还可应用于在类器官水平上进行治疗药物筛选，或是用于试验病毒递送载体进行基因治疗。