公开(公告)号：CN114107268B

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202111337476.0

申请日：2021-11-09

Applicant: 南开大学

Inventor： 王宁宁 ,  梅圆圆 ,  李鑫 ,  郝博威 ,  徐畅 ,  孙公岭 ,  王丹

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N15/64 ,  C12N15/82 ,  A01H5/08 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明适用于基因工程技术领域，提供了高等植物ACS双酶活关键结构域替换制备得到的单酶突变体，包括保守序列为F‑Q‑D‑Y‑H‑G‑[LM]‑[PSKL]的BOX2保守域、保守序列为M‑S‑S‑F‑[GT]‑L‑[VI]‑S‑S‑Q‑T‑Q的BOX6保守域，以及保守序列为T‑N‑P‑S‑N‑P‑L‑G‑[TA]‑[TAMVIF]的BOX4保守域。将这些保守域序列进行重组替换后，ACS重组蛋白只具有ACS或C‑S裂解酶单酶活性。将拟南芥ACS7基因组中BOX2、BOX6或BOX4保守域的相应位置与小立碗藓相应序列进行重组，重组后的蛋白R6、R10仅具有C‑S裂解酶活性而R12仅具有ACS活性。本发明不仅鉴定了影响高等植物ACS蛋白ACS和C‑S裂解酶活性的关键结构域，更为利用基因工程方法控制乙烯参与的多项生命过程比如果实成熟等提供了关键靶点，在抗逆作物分子育种中也具有广阔的应用前景和重要的经济价值。

公开(公告)号：CN114107268A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111337476.0

申请日：2021-11-09

Applicant: 南开大学

Inventor： 王宁宁 ,  梅圆圆 ,  李鑫 ,  郝博威 ,  徐畅 ,  孙公岭 ,  王丹

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N15/64 ,  C12N15/82 ,  A01H5/08 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明适用于基因工程技术领域，提供了高等植物ACS双酶活关键位点突变制备单酶活突变体，ACS单酶活性关键位点包括保守域BOX2保守序列F‑Q‑D‑Y‑H‑G‑[LM]‑[PSKL]中的Q位点和保守域BOX4保守序列T‑N‑P‑S‑N‑P‑L‑G‑[TA]‑[TAMVIF]中的[TA]‑[TAMVIF]位点，以及C‑S裂解酶单酶活性关键位点，包括保守域ACS‑motif 5保守序列D‑F‑x(3)‑K‑N‑I‑H‑L‑[IV]‑S‑D‑E‑I‑[YF]‑[SA]‑G‑[TS]‑V‑F中的第13个氨基酸D。在拟南芥ACS7蛋白中，根据其在所有编码氨基酸中的位置，上述位点分别对应Q98、A221和T222，以及D245位点。将上述位点突变为其他氨基酸，会导致突变后的ACS蛋白只具有ACS或C‑S裂解酶单酶活性。本发明为利用基因工程方法控制乙烯参与的多项生命过程如果实成熟等提供了关键靶点，在抗逆作物分子育种中也具有广阔的应用前景和重要的经济价值。