以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的BIV指示细胞系

    公开(公告)号:CN101100675B

    公开(公告)日:2011-01-19

    申请号:CN200710057672.6

    申请日:2007-06-19

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一株指示牛免疫缺陷病毒BIV感染的细胞系及其应用。该细胞系可以在BIV感染的特定条件下表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP),从而通过检测该蛋白的表达来间接指示牛免疫缺陷病毒的感染。该细胞系(其保藏号为CGMCC No.2050)的构建过程:首先构建成一个可以应答牛免疫缺陷病毒感染的具有序列表所示核苷酸序列的报告质粒,之后,将该质粒转染BHK-21细胞,筛选稳定表达的细胞系并单克隆化;挑选无本底表达但经过BIV病毒攻击后高表达EGFP的阳性克隆即为BIV的指示细胞系。本发明具有快速简便且可以实时指示BIV感染和BIV反式激活因子激活作用的特点。

    以萤火虫荧光素酶为报告基因的BIV感染性指示细胞系

    公开(公告)号:CN101100674B

    公开(公告)日:2010-11-03

    申请号:CN200710057671.1

    申请日:2007-06-19

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一株指示牛免疫缺陷病毒(Bovine Immunodeficiency Virus,BIV)感染的细胞系及其应用。该细胞系可以在BIV感染的特定条件下表达萤火虫荧光素酶(firefly luciferase),从而通过检测萤火虫荧光素酶的活性来间接指示牛免疫缺陷病毒的感染。该细胞系(其保藏号为CGMCC No.2049)的构建过程:萤火虫荧光素酶的基因插入到一种特异应答牛免疫缺陷病毒反式激活因子的应答元件下游构建指示质粒;将该质粒转染BHK-21细胞,筛选稳定表达的细胞系并单克隆化;挑选经过BIV病毒攻击后萤火虫荧光素酶的活性明显增高的阳性克隆即为BIV的指示细胞系。本发明具有可以定量指示BIV感染和BIV反式激活因子激活作用的特点。

    以萤火虫荧光素酶为报告基因的BIV感染性指示细胞系

    公开(公告)号:CN101100674A

    公开(公告)日:2008-01-09

    申请号:CN200710057671.1

    申请日:2007-06-19

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一株指示牛免疫缺陷病毒(Bovine Immunodeficiency Virus,BIV)感染的细胞系及其应用。该细胞系可以在BIV感染的特定条件下表达萤火虫荧光素酶(firefly luciferase),从而通过检测萤火虫荧光素酶的活性来间接指示牛免疫缺陷病毒的感染。该细胞系(其保藏号为CGMCC No.2049)的构建过程:萤火虫荧光素酶的基因插入到一种特异应答牛免疫缺陷病毒反式激活因子的应答元件下游构建指示质粒;将该质粒转染BHK-21细胞,筛选稳定表达的细胞系并单克隆化;挑选经过BIV病毒攻击后萤火虫荧光素酶的活性明显增高的阳性克隆即为BIV的指示细胞系。本发明具有可以定量指示BIV感染和BIV反式激活因子激活作用的特点。

    一株指示牛泡沫病毒感染的细胞系及其应用

    公开(公告)号:CN101058802A

    公开(公告)日:2007-10-24

    申请号:CN200710057154.4

    申请日:2007-04-17

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一株指示牛泡沫病毒感染的细胞系及其应用。该细胞系可以在BFV感染的特定条件下表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP),从而通过检测该蛋白的表达来间接指示牛泡沫病毒的感染。该细胞系(其保藏号为CGMCC No.1989)的构建过程:首先将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的全长基因插入到一种特异应答牛泡沫病毒反式激活因子的应答元件下游,构建成一个可以应答牛泡沫病毒感染的报告质粒;之后,采用脂质体的方法将该质粒转染BHK-21细胞,转染后第二天,细胞进行1∶5传代,并加入G418进行筛选,一星期后细胞开始大量死亡,至20天,细胞开始成簇生长,经过初筛后,将细胞利用1/2有限稀释法进行单克隆化操作,最终筛选到无本底表达但经过病毒攻击后EGFP表达量高的阳性克隆即为BFV的指示细胞系。

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