公开(公告)号：CN102352360B

公开(公告)日：2012-10-10

申请号：CN201110357481.8

申请日：2011-11-11

Applicant: 南开大学

Inventor： 刘畅 ,  孔晓红 ,  梁之聘 ,  袁青 ,  刁丹红

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/68

Abstract: 抑制HIV-1的双长发卡结构RNA表达原件构建及功能检测，本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原理以及HIV-1序列保守性分析，选择HIV-1的衣壳蛋白gag基因（532－552），包膜蛋白env基因（1428－1448），非结构蛋白tat基因（131－151）和vpu基因（143－161），设计相应siRNA序列，通过两次Two-stepPCR的方法，最终构建双长发卡结构RNA表达原件（序列表SEQIDNo.1所示），通过显微荧光观测以及流式细胞分析定量检测双长发卡结构RNA表达原件对HIV基因EGFP融合蛋白真核表达的抑制效果。实验证实dlhRNA表达原件可以有效抑制HIV多个基因的表达。

公开(公告)号：CN102352360A

公开(公告)日：2012-02-15

申请号：CN201110357481.8

申请日：2011-11-11

Applicant: 南开大学

Inventor： 刘畅 ,  孔晓红 ,  梁之聘 ,  袁青 ,  刁丹红

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/68

Abstract: 抑制HIV-1的双长发卡结构RNA表达原件构建及功能检测，本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原理以及HIV-1序列保守性分析，选择HIV-1的衣壳蛋白gag基因（532－552），包膜蛋白env基因（1428－1448），非结构蛋白tat基因（131－151）和vpu基因（143－161），设计相应siRNA序列，通过两次Two-stepPCR的方法，最终构建双长发卡结构RNA表达原件（序列表SEQIDNo.1所示），通过显微荧光观测以及流式细胞分析定量检测双长发卡结构RNA表达原件对HIV基因EGFP融合蛋白真核表达的抑制效果。实验证实dlhRNA表达原件可以有效抑制HIV多个基因的表达。

公开(公告)号：CN103695450A

公开(公告)日：2014-04-02

申请号：CN201310707633.1

申请日：2013-12-20

Applicant: 南开大学

Inventor： 孔晓红 ,  刘畅 ,  赵学潮 ,  刘彬 ,  沈文远

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N7/01

Abstract: 荧光重组病毒竞争实验体系的建立，本发明属基因工程技术领域。在该体系中，分别以表达绿色荧光蛋白（EGFP）和红色荧光蛋白（DsRed2）的B亚型标准株NL4.3（△Env）为骨架，将源自两种不同HIV-1病毒的env基因通过同源重组的方法，构建荧光重组嵌合病毒。两种携有不同荧光蛋白的竞争病毒分别单独感染及共感染靶细胞U87。不同的荧光蛋白作为区分两种竞争病毒的标签，通过流式细胞技术分别计算带有不同荧光的细胞个数，可以快速准确地获得不同病毒感染的细胞数量。经过相应计算可以得到两种竞争病毒的相对适应性。HIV-1复制适应性可以通过一系列统计计算得到，其成为反应HIV-1对特定宿主细胞环境适应能力的量化指标。