公开(公告)号：CN101824388A

公开(公告)日：2010-09-08

申请号：CN200910068037.7

申请日：2009-03-06

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  武志强 ,  赵磊 ,  廖芳 ,  李娜 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  王维婧 ,  卫一鸣 ,  陈苗 ,  王瑞菊

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  A61K36/064 ,  A61P3/10 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明描述了一种糖尿病食疗酵母及其构建方法。该重组酵母是以酿酒酵母基因组DNA为模板扩增两段rDNA序列；以pYX212为模板扩增营养标记基因URA3和磷酸丙糖异构酶启动子驱动的表达盒片段；将四个扩增产物分别克隆到pUC18的相应位点，得到整合型载体pNK1。再利用DNA合成点突变技术除去天然GLP-1分子中的二肽酶VI和胰蛋白酶的酶切位点，合成I、II型和左右连接补平引物片段，用分步退火一步连接法获得十拷贝串联rolGLP-1序列并将之克隆到pNK1中得到pNK-GLP。然后线性化pNK-GLP并转化酿酒酵母BJ2407，筛选得到重组酵母SG2。因rolGLP-1基因整合于酵母染色体中，该重组菌株具有稳定高效表达rolGLP-1的特性和降低高血糖大鼠血糖水平的功能，可用于开发治疗糖尿病的酵母生物药物。

公开(公告)号：CN102839185B

公开(公告)日：2014-06-25

申请号：CN201110166533.3

申请日：2011-06-21

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  卫一鸣 ,  王维婧 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  张耀方 ,  乔坤艳 ,  李宠 ,  马志华

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  A61K38/58 ,  A61P3/10 ,  A61P7/02 ,  C12R1/19 ,  A61K38/26

Abstract: 本发明涉及一种生产治疗糖尿病及血栓并发症的双功能药物(rolGLP-HV)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将对2型糖尿病具有“治标治本”疗效的长效促胰岛素rolGLP-1与有效防治其心脑血管并发症的水蛭素rHV1融合，使其具有预防和治疗糖尿病及血栓并发症的双重功能。具体来说，应用基因工程技术获得rolGLP-1和rHV1的融合基因rolGLP-HV，并将其克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+)，构建表达载体pNK-EC-rolGLP-HV，转化大肠杆菌，获得高表达rolGLP-HV的工程菌NK-rolGLP-HV-E007。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度rolGLP-HV。胡氏血栓模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能药物。

公开(公告)号：CN102839185A

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201110166533.3

申请日：2011-06-21

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  卫一鸣 ,  王维婧 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  张耀方 ,  乔坤艳 ,  李宠 ,  马志华

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  A61K38/58 ,  A61P3/10 ,  A61P7/02 ,  C12R1/19 ,  A61K38/26

Abstract: 本发明涉及一种生产治疗糖尿病及血栓并发症的双功能药物(rolGLP-HV)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将对2型糖尿病具有“治标治本”疗效的长效促胰岛素rolGLP-1与有效防治其心脑血管并发症的水蛭素rHV1融合，使其具有预防和治疗糖尿病及血栓并发症的双重功能。具体来说，应用基因工程技术获得rolGLP-1和rHV1的融合基因rolGLP-HV，并将其克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+)，构建表达载体pNK-EC-rolGLP-HV，转化大肠杆菌，获得高表达rolGLP-HV的工程菌NK-rolGLP-HV-E007。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度rolGLP-HV。胡氏血栓模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能药物。