公开(公告)号：CN100453643C

公开(公告)日：2009-01-21

申请号：CN200610040269.8

申请日：2006-07-19

Applicant: 南京师范大学

Inventor： 殷志敏 ,  沈佳胤 ,  罗兰 ,  张泓 ,  王宇

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/09 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K38/45 ,  A61P31/00 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种人谷胱甘肽-S-转移酶Pi的纯化方法，其方法步骤为：(1)将含表达载体pET-28a/hGSTpi的E.coli BL21/DE3菌株接种于LB固体培养基，振荡培养，离心收集菌体；(2)按每g菌体沉淀加入PH7.9的结合缓冲液重悬收集菌体沉淀，经超声破碎、离心后取上清液，用缓冲液洗脱；(3)将洗脱上清用透析液1透析去咪唑，再用透析液2透析测定酶活性；(4)用PBS缓冲液透析，用凝血酶水解切割His6标签，获得人谷胱甘肽-S-转移酶hGSTpi。本发明方法纯化得到的hGSTpi重组蛋白纯度高，且空气氧化形成的无活性二聚体少，hGSTpi在炎症治疗中的应用，不仅能有效控制炎症，而且对机体免疫系统的影响小，副作用极小。

公开(公告)号：CN101239184A

公开(公告)日：2008-08-13

申请号：CN200710306237.2

申请日：2006-07-19

Applicant: 南京师范大学

Inventor： 殷志敏 ,  沈佳胤 ,  罗兰 ,  张泓 ,  王宇

IPC: A61K38/45 ,  A61P31/00 ,  A61P31/04 ,  C12N9/10 ,  C12N15/09 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明涉及人谷胱苷肽－S－转移酶pi的新用途，具体涉及采用His－tag重组蛋白纯化技术纯化的人谷胱苷肽－S－转移酶pi在制备治疗全身炎症反应综合症疾病以及由革兰氏杆菌引起炎症性疾病药物中的应用。6xHis－tag标签分子量小，不会影响被修饰蛋白质的生理pH值，在大部分情况下不会改变被修饰蛋白质的免疫原性，结构和功能，也不会干扰蛋白的分泌；人谷胱苷肽－S－转移酶pi在制备治疗炎症药物中的应用，不仅能有效控制炎症，避免其进一步发展，而且对机体免疫系统的影响较小，作为一种内源性蛋白，给药后不会引起免疫反应，副作用极小。

公开(公告)号：CN1869210A

公开(公告)日：2006-11-29

申请号：CN200610040269.8

申请日：2006-07-19

Applicant: 南京师范大学

Inventor： 殷志敏 ,  沈佳胤 ,  罗兰 ,  张泓 ,  王宇

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/09 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K38/45 ,  A61P31/00 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种人谷胱甘肽－S－转移酶Pi的纯化方法，其方法步骤为：(1)将含表达载体pET－28a/hGSTpi的E.coli BL21/DE3菌株接种于LB固体培养基，振荡培养，离心收集菌体；(2)按每g菌体沉淀加入pH7.9的结合缓冲液重悬收集菌体沉淀，经超声破碎、离心后取上清液，用缓冲液洗脱；(3)将洗脱上清用透析液1透析去咪唑，再用透析液2透析测定酶活性；(4)用PBS缓冲液透析，用凝血酶水解切割His6标签，获得人谷胱甘肽－S－转移酶hGSTpi。本发明方法纯化得到的hGSTpi重组蛋白纯度高，且空气氧化形成的无活性二聚体少，hGSTpi在炎症治疗中的应用，不仅能有效控制炎症，而且对机体免疫系统的影响小，副作用极小。