一种用于鉴别近缘微生物的核苷酸片段的筛选方法

    公开(公告)号:CN109266768A

    公开(公告)日:2019-01-25

    申请号:CN201811373222.2

    申请日:2018-11-19

    Abstract: 本发明公开了一种用于鉴别近缘微生物的核苷酸片段的筛选方法,该方法是将目标微生物的全基因序列利用电子剪切技术剪切成含重叠区的核酸小片段;核酸小片段的fasta文件在NCBI NT数据库中比对;得到命中表Ⅰ,删除重复序列,进而获得命中核酸序列;命中核酸序列Ⅰ与含重叠区的核酸小片段进行比对,获得非命中核酸序列;重复上述步骤一次,设计PCR引物,提取目标微生物菌株所在属或近缘属的菌株10种以上的基因组总DNA,构建核酸池,PCR扩增验证。本发明提供的用于近缘菌株鉴别的特异性核酸筛选方法能够高效率地大量获得目的微生物菌株的特异性核酸序列,实验结果的可重现性极高,简化了整个实验过程,具有良好的适用性。

    一株产普鲁兰酶菌株及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN118291353A

    公开(公告)日:2024-07-05

    申请号:CN202410536010.0

    申请日:2024-04-30

    Abstract: 本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一株产普鲁兰酶菌株及其构建方法与应用。本发明构建的产普鲁兰酶菌株,是以枯草芽孢杆菌168Δ9为底盘菌株,通过双启动子表达质粒过表达普鲁兰酶基因得到的。所述双启动子是由启动子P43与启动子P43、启动子PHpaⅡ、启动子PLypR、启动子P223、启动子P556、启动子P566、启动子P6366中的任意一种组成,所述的普鲁兰酶基因包括基因amyX、基因pulA、基因pulB、基因pulD、基因Bapul13A中的任意一种。本发明构建得到的产普鲁兰酶菌株可显著提高普鲁兰酶的产量,且胞外积累的酶活更高,通过优化发酵培养基更进一步提高了普鲁兰酶的产量和酶活。减少人工、时间和材料的成本,且无需担心安全问题,可直接用于食品工业方面。

    一种表面展示普鲁兰酶的重组菌及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN119639640A

    公开(公告)日:2025-03-18

    申请号:CN202411724504.8

    申请日:2024-11-28

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种表面展示普鲁兰酶的重组菌及其构建方法与应用。以枯草芽孢杆菌为底盘菌株,利用淀粉样纤维蛋白tasA或分选酶锚定普鲁兰酶,构建得到了一种表面展示普鲁兰酶的重组菌。利用该重组菌株在连续发酵、连续催化生产普鲁兰酶中,无需提取和纯化胞外普鲁兰酶,无需再利用物理或者化学方法进行酶固定化,大幅度减少了多步操作过程中带来的酶活损失,并且该方法结合生物膜连续化发酵的优点使得表面展示酶活复苏,不会像传统固定化方式酶活越来越低。带来高收益,低成本,节约资源,减少环境污染等优点,该方法也为以后普鲁兰酶的催化提供新思路。

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