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公开(公告)号：CN103243078B
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201310208383.7
申请日：2013-05-29
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先筛选突变热点区域；再确定位于蛋白质表面且柔性较大区域的氨基酸位点；结合上述两步理性分析，筛选得到的氨基酸位点突变成天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸四种氨基酸残基的任意一种，并以该氨基酸为中心，在4？范围内寻找上述4种氨基酸中带相反电荷的氨基酸残基，从而确定突变位点及突变残基；基于对酶结构与功能关系的认知，再解析离子键引入对稳定枯草芽孢杆菌脂肪酶A蛋白结构的作用机制；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。
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公开(公告)号：CN103966186A
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201410137657.2
申请日：2014-04-08
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/96 , C12N9/20 , C12Y301/01003
Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先从RCSB数据库中获取其晶体结构，再利用分子动力学分析其不同Loop区域的柔性；经由上述理性分析，并结合“脯氨酸效应”理论，将筛选得到柔性较高Loop区域的甘氨酸残基突变为脯氨酸；再通过分子动力学模拟验证筛选得到的突变结果；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。
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公开(公告)号：CN103243078A
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201310208383.7
申请日：2013-05-29
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先筛选突变热点区域；再确定位于蛋白质表面且柔性较大区域的氨基酸位点；结合上述两步理性分析，筛选得到的氨基酸位点突变成天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸四种氨基酸残基的任意一种，并以该氨基酸为中心，在4Å范围内寻找上述4种氨基酸中带相反电荷的氨基酸残基，从而确定突变位点及突变残基；基于对酶结构与功能关系的认知，再解析离子键引入对稳定枯草芽孢杆菌脂肪脂肪酶A蛋白结构的作用机制；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。
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公开(公告)号：CN103966186B
公开(公告)日：2016-04-13
申请号：CN201410137657.2
申请日：2014-04-08
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先从RCSB数据库中获取其晶体结构，再利用分子动力学分析其不同Loop区域的柔性；经由上述理性分析，并结合“脯氨酸效应”理论，将筛选得到柔性较高Loop区域的甘氨酸残基突变为脯氨酸；再通过分子动力学模拟验证筛选得到的突变结果；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。
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