一种高通量筛选核酸酶的方法

    公开(公告)号:CN114134130B

    公开(公告)日:2023-06-27

    申请号:CN202111180434.0

    申请日:2021-10-11

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,特别是涉及一种高通量筛选核酸酶的方法,包括如下步骤:随机突变核酸酶基因,并构建线性核酸酶突变文库;制成核酸酶文库突变酵母细胞;将Azide‑NHS标记到突变酵母细胞表面后与DBCO‑引物共孵育;带有引物的突变酵母细胞于诱导培养基中培养,再与底物共孵育;将洗涤后的酵母细胞与探针共孵育,反应后检测所得酵母细胞的荧光强度,筛选出目标核酸酶。本发明基于核酸酶突变体文库中的酿酒酵母细胞来筛选高活性核酸酶,筛选步骤简单,偶联了DNA产物的长度与酵母表面核酸酶的酶活,在反应原位检测荧光强度,更加快速且高效,实现利用FACS的酶活高通量筛选,对核酸酶的定向进化具有深远意义。

    一种具有抗肿瘤功能的二维红磷纳米材料

    公开(公告)号:CN112426527B

    公开(公告)日:2021-09-28

    申请号:CN202011377221.2

    申请日:2020-11-30

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明提供一种具有抗肿瘤功能的二维红磷纳米材料,具体涉及生物医药领域,S1、将碘化磷(PI3)与半胱氨酸反应,并在反应体系中加入十六烷基三甲基溴化铵(CATB)和聚吡咯烷酮(PVP,MW10000),剧烈搅拌混合均匀;S2、搅拌结束后,反应体系在室温条件下静置24h,离心收集沉淀;S3、将沉淀物进一步分散到无水乙醇了中,水浴超声2h,离心收集沉淀,并用乙醇洗涤沉淀3次,冷冻干燥即可获得目产品。本发明能够高效诱导肿瘤细胞自噬,引起细胞内自噬紊乱,从而发挥抗肿瘤功能,并且在活体上表现出优异的抑瘤效果。

    高聚磷酸盐及一步法发酵生产高聚磷酸盐的方法

    公开(公告)号:CN115521945B

    公开(公告)日:2023-09-12

    申请号:CN202211328474.X

    申请日:2022-10-26

    Abstract: 本发明公开了一种高聚磷酸盐及一步法发酵生产高聚磷酸盐的方法,属于高聚磷酸盐生产技术领域。本发明所述方法包括如下步骤:从长有弗氏柠檬酸杆菌的LB平板上挑取单克隆至种子培养基,得到种子培养液,将种子培养液接种于磷聚培养基进行发酵,制得发酵液;收集发酵液离心、过滤得到菌泥、将菌泥冻干、碳化、研磨、灰化、用氯化锂溶解灰化产物、离心、收集上清液,冻干得到高聚磷酸盐。本发明所述制备工艺流程无需高温或高压装置设备,制备工艺流程简单,降低了生产成本、生产步骤少、缩短了发酵周期、提高了菌体的聚磷速度和聚磷量以及高聚磷酸盐产量。

    一种高温保护正电蛋白+36GFP荧光的方法

    公开(公告)号:CN112430272A

    公开(公告)日:2021-03-02

    申请号:CN202011270199.1

    申请日:2020-11-13

    Applicant: 南京大学

    Inventor: 魏炜 朱龙倩 赵劲

    Abstract: 本发明提供一种高温保护正电蛋白+36GFP荧光的方法,具体涉及生物技术领域,通过生物合成polyP及+36GFP,将不同浓度的polyP和不同浓度的+36GFP混合,检测加入不同浓度polyP对+36GFP的荧光强度的影响。将polyP和+36GFP按不同浓度混合室温放置一段时间后,将不同浓度混合后的样品在不同温度梯度下孵育10min,检测加入不同浓度polyP对+36GFP的荧光强度的影响。将polyP和+36GFP按不同浓度混合室温放置一段时间后,再置于不同PH条件中孵育半小时,检测加入不同浓度polyP对+36GFP的荧光强度的影响。将polyP和+36GFP按不同浓度混合室温放置一段时间后,再置于不同浓度的蛋白变性溶液中孵育半小时,检测加入不同浓度polyP对+36GFP的荧光强度的影响。本发明利用polyP可作为分子伴侣的性质在较高温度下对+36GFP进行荧光保护。

    一种高通量筛选核酸酶的方法

    公开(公告)号:CN114134130A

    公开(公告)日:2022-03-04

    申请号:CN202111180434.0

    申请日:2021-10-11

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,特别是涉及一种高通量筛选核酸酶的方法,包括如下步骤:随机突变核酸酶基因,并构建线性核酸酶突变文库;制成核酸酶文库突变酵母细胞;将Azide‑NHS标记到突变酵母细胞表面后与DBCO‑引物共孵育;带有引物的突变酵母细胞于诱导培养基中培养,再与底物共孵育;将洗涤后的酵母细胞与探针共孵育,反应后检测所得酵母细胞的荧光强度,筛选出目标核酸酶。本发明基于核酸酶突变体文库中的酿酒酵母细胞来筛选高活性核酸酶,筛选步骤简单,偶联了DNA产物的长度与酵母表面核酸酶的酶活,在反应原位检测荧光强度,更加快速且高效,实现利用FACS的酶活高通量筛选,对核酸酶的定向进化具有深远意义。

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