公开(公告)号：CN1706947A

公开(公告)日：2005-12-14

申请号：CN200410055552.9

申请日：2004-08-04

Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心

Inventor： 刘建宁 ,  孙自勇 ,  张菁 ,  陈均勇 ,  陈新园

IPC: C12N15/16 ,  C12N15/70 ,  C07K14/635 ,  A61K38/29

Abstract: 本发明涉及医药生物工程技术领域，是包括涉及编码人甲状旁腺激素小肽的cDNA，和利用其表达载体制备人甲状旁腺激素的方法。本发明将化学合成的重组人甲状旁腺激素(1－34)基因用PCR扩增后，克隆至表达载体pET－35b(+)，使重组人甲状旁腺激素(1－34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端，并得到高效表达。融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后，经Factor Xa裂解释放出rhPTH(1－34)，再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1－34)纯品。每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1－34)。经质谱测定，所得样品的分子量为4117.0道尔顿，与rhPTH(1－34)理论分子量一致。本发明极大程度上丰富了该多肽在医药生物工程技术领域的研究和开发。

公开(公告)号：CN1706946A

公开(公告)日：2005-12-14

申请号：CN200410055550.X

申请日：2004-08-04

Applicant: 南京大学

Inventor： 刘建宁 ,  孙自勇 ,  陈均勇 ,  张菁 ,  吴盛

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/16 ,  C12N15/70 ,  C07K1/14 ,  C07K14/435 ,  C07K14/575 ,  C07H21/00 ,  G01N33/68 ,  G01N33/74

Abstract: 本发明涉及医药生物工程技术领域，是一种重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法。本发明用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18－T载体中，经过KpnI/SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn－Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白－胸腺肽α1融合蛋白。经凝血因子Xa酶切、Zn－Sepharose亲和层析以及反向高效液相色谱纯化获得3.8mg重组人胸腺肽。小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系。