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公开(公告)号：CN101638634B
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN200910034261.4
申请日：2009-09-03
Applicant: 南京大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了一种提取蚯蚓体腔细胞的溶液及超声方法，属于生物工程技术领域。提取蚯蚓体腔细胞的溶液，以每3mL计其中含有60-70mM NaCl、重量含量5％-6％ethanol、50-60mM guaicol glyceryl ether和5-6mM EGTA的PBS缓冲液。操作步骤：第一步，蚯蚓清肠，用PBS缓冲液反复清洗；第二步，将蚯蚓放入.冰冷提取体腔细胞的溶液中，迅速以超声进行提取；第三步，移去蚯蚓，加入LBBS缓冲液清洗，离心，去上清，所得沉淀为体腔细胞；第四步，加入细胞液孵育；第五步，台盼蓝染色、镜检，计算细胞存活率。本发明所提取的体腔细胞数量多，成活率高，能满足细胞凋亡以及单细胞凝胶电泳实验的需要，能用于对土壤污染进行早期诊断，实现早期预警的作用。
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公开(公告)号：CN101639454A
公开(公告)日：2010-02-03
申请号：CN200910034260.X
申请日：2009-09-03
Applicant: 南京大学
IPC: G01N24/10
Abstract: 本发明公开了一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法。首先将充分暴露的蚯蚓清肠，清洗，在密闭的已经除氧的密闭操作箱中进行自由基的PBN捕获，最后用EPR技术进行测定。本发明的优点在于：操作较为简单，容易掌握，并能在很短的时间内测得蚯蚓的羟基自由基；根据EPR谱图的超精细结构常数和谱图的形状分析，发现所测定的自由基是羟基自由基，是目前测定羟基自由基最直接、最准确有效的方法；具有较好的剂量效应关系。研究结果显示羟基自由基的强度与暴露物的浓度存在着较好的剂量-效应关系。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104931668A
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201510260201.X
申请日：2015-05-21
Applicant: 南京大学
CPC classification number: Y02A20/206
Abstract: 本发明涉及环境保护领域的水质监测方法，具体涉及一种用DNA氧化损伤产物-8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)为标志物定量评价污染水体遗传毒性效应的测试方法。该方法基于DNA氧化损伤是外源性污染物导致生物体遗传毒性的最常见生物学机制，以8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)为标志物，检测污染水体对鱼类体内的DNA氧化损伤程度，并以4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)或苯并[a]芘为阳性参照物，定量评价污染水体的遗传毒性效应。该方法可综合评价污染水体对生物的遗传毒性效应，具有操作简单、实验周期短、反应灵敏、重现性好等优点，非常适用于各种类型污染水体的遗传毒性定量评价，将在水质监测工作中有广阔应用前景。
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公开(公告)号：CN101638634A
公开(公告)日：2010-02-03
申请号：CN200910034261.4
申请日：2009-09-03
Applicant: 南京大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 发明公开了一种提取蚯蚓体腔细胞的溶液及超声方法，属于生物工程技术领域。提取蚯蚓体腔细胞的溶液，以每3mL计其中含有60-70mM NaCl、重量含量5％-6％ethanol、50-60mM guaicol glyceryl ether和5-6mM EGTA的PBS缓冲液。操作步骤：第一步，蚯蚓清肠，用PBS缓冲液反复清洗；第二步，将蚯蚓放入冰冷提取体腔细胞的溶液中，迅速以超声进行提取；第三步，移去蚯蚓，加入LBBS缓冲液清洗，离心，去上清，所得沉淀为体腔细胞；第四步，加入细胞液孵育；第五步，台盼蓝染色、镜检，计算细胞存活率。本发明所提取的体腔细胞数量多，成活率高，能满足细胞凋亡以及单细胞凝胶电泳实验的需要，能用于对土壤污染进行早期诊断，实现早期预警的作用。
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公开(公告)号：CN104931668B
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201510260201.X
申请日：2015-05-21
Applicant: 南京大学
CPC classification number: Y02A20/206
Abstract: 本发明涉及环境保护领域的水质监测方法，具体涉及一种用DNA氧化损伤产物-8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)为标志物定量评价污染水体遗传毒性效应的测试方法。该方法基于DNA氧化损伤是外源性污染物导致生物体遗传毒性的最常见生物学机制，以8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)为标志物，检测污染水体对鱼类体内的DNA氧化损伤程度，并以4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)或苯并[a]芘为阳性参照物，定量评价污染水体的遗传毒性效应。该方法可综合评价污染水体对生物的遗传毒性效应，具有操作简单、实验周期短、反应灵敏、重现性好等优点，非常适用于各种类型污染水体的遗传毒性定量评价，将在水质监测工作中有广阔应用前景。
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公开(公告)号：CN102128915B
公开(公告)日：2013-11-06
申请号：CN201010568542.0
申请日：2010-12-02
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明提供了利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法，属于土壤污染监测与控制技术领域。该方法以人工养殖蚯蚓为标准试验动物，以氧自由基、丙二醛含量、蛋白质羰基含量以及还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比例4种氧化损伤测试指标为诊断土壤污染的生物标志物，以清洁人工土壤为标准土壤，通过分析清洁人工土壤和供试土壤培养一定时间后蚯蚓体内4种氧化损伤指标的差异，可快速灵敏地诊断供试土壤污染状况。本发明可用于全面诊断土壤污染状况和健康程度，该方法对土壤中的痕量污染物有很好的敏感性，可作为土壤污染早期预警的监测方法。与化学分析方法相对，本发明具有操作简单，成本低廉的特点。
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公开(公告)号：CN102128915A
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN201010568542.0
申请日：2010-12-02
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明提供了利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法，属于土壤污染监测与控制技术领域。该方法以人工养殖蚯蚓为标准试验动物，以氧自由基、丙二醛含量、蛋白质羰基含量以及还原型谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽比例4种氧化损伤测试指标为诊断土壤污染的生物标志物，以清洁人工土壤为标准土壤，通过分析清洁人工土壤和供试土壤培养一定时间后蚯蚓体内4种氧化损伤指标的差异，可快速灵敏地诊断供试土壤污染状况。本发明可用于全面诊断土壤污染状况和健康程度，该方法对土壤中的痕量污染物有很好的敏感性，可作为土壤污染早期预警的监测方法。与化学分析方法相对，本发明具有操作简单，成本低廉的特点。
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