公开(公告)号：CN1065913C

公开(公告)日：2001-05-16

申请号：CN97106985.9

申请日：1997-06-03

Applicant: 南京大学

Inventor： 徐贤秀 ,  朱龙根 ,  朱德煦 ,  董雪吟 ,  邱奇峰 ,  谢维

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  A61K38/17

Abstract: 本发明属于基因工程生产多肽药物领域，其目的在于创造一种新药，可抗肿瘤及治疗耐药菌感染疾病。本发明参照了杀菌肽CMIV的氨基酸序列，化学合成其基因。将合成的基因在大肠杆菌中实现两种体系融合表达，表达水平分别为50%和30%。裂解融合蛋白，经层析，最后可获得SDS-PAGE银染一条带的纯品。用重组杀菌肽-X纯品对白血病细胞株和白血病病人白细胞都有良好的杀伤作用；另外，对几种耐药细菌都有明显杀伤性。

公开(公告)号：CN1205361A

公开(公告)日：1999-01-20

申请号：CN97106985.9

申请日：1997-06-03

Applicant: 南京大学

Inventor： 徐贤秀 ,  朱龙根 ,  朱德煦 ,  董雪吟 ,  邱奇峰 ,  谢维

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  A61K38/17

Abstract: 本发明属于基因工程生产多肽药物领域,其目的在于创造一种新药,可抗肿瘤及治疗耐药菌感染疾病。本发明参照了杀菌肽CMⅣ的氨基酸序列,化学合成其基因。将合成的基因在大肠杆菌中实现两种体系融合表达,表达水平分别为50%和30%。裂解融合蛋白,经层析,最后可获得SDS－PAGE银染一条带的纯品。用重组杀菌肽－X纯品对白血病细胞株和白血病病人白细胞都有良好的杀伤作用;另外,对几种耐药细菌都有明显杀伤性。

公开(公告)号：CN101089188A

公开(公告)日：2007-12-19

申请号：CN200610027651.5

申请日：2006-06-13

Applicant: 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 ,  南京大学

Inventor： 沈益 ,  劳学刚 ,  张洪祖 ,  徐贤秀

IPC: C12P21/00 ,  A61P35/00 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明提供了一种杀菌肽－X纯化工艺，通过本发明工艺可制得稳定高纯度的水溶性杀菌肽－X。将此杀菌肽－X应用于初期抗恶性肿瘤的体外细胞实验和体内的动物实验，证明杀菌肽－X疗效明显，且重复性极好。本工艺主要解决了发酵后包涵体纯化；融合蛋白变性剂种类及酸浓度的选择；透析缓冲液种类及pH选择和透析温度的选择。利用所选定的条件，1g包涵体可稳定得到10mg纯度在95％以上的杀菌肽－X。

公开(公告)号：CN1884573A

公开(公告)日：2006-12-27

申请号：CN200610026829.4

申请日：2006-05-24

Applicant: 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 ,  南京大学

Inventor： 沈益 ,  劳学刚 ,  张洪祖 ,  徐贤秀

IPC: C12P21/02

Abstract: 本发明公开了一种杀菌肽－X的发酵工艺。本发明通过选择用于发酵的菌种种龄和优化培养基，使融合蛋白得到高表达，最终每升发酵液可获得包涵体5.05g，其中融合蛋白的含量＞80％。本发明是一种稳定、高表达并适于工业化生产的杀菌肽－X发酵工艺。

公开(公告)号：CN1123326A

公开(公告)日：1996-05-29

申请号：CN94111496.1

申请日：1994-11-09

Applicant: 南京大学

Inventor： 徐贤秀

IPC: C12N15/28 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C07K1/14 ,  A61K38/16 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明属于基因工程生产多肽药物领域，用于治疗恶性肿瘤。本发明所述改良型TNF为删除TNF第三、四位的丝氨酸和第七、八位的苏氨酸、脯氨酸，将第五位的丝氨酸改为赖氨酸，由153个氨基酸组成的TNF变体蛋白。改良后的TNF基因在大肠杆菌中高效表达并分离纯化成单一组分纯品，比活为3-8×107u/mg，比天然TNF比活高3-5倍，毒性也相应降低，基因表达水平比天然TNF表达水平高一倍，由24％增加至50％左右，因此，分离纯化工艺简单，得率高，成本低，适宜大规模生产。